1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
磷脂是细胞膜的主要组成部分，参与感受、应答细胞外刺激和胁迫。磷脂酶 (phospholipases) 是催化磷脂水解的并且普遍存在于各类细胞中一种水解酶。根据切割磷脂位点的差异，磷脂酶可分为4 大类 ：磷脂酶a1 (phospholipase a1, pla1)、磷脂酶a2 (pla2)、磷脂酶c (plc)和磷脂酶d(pld)[1]。其中，磷脂酶c介导的细胞信号通路是信号转导中最经典的通路之一[2]。依据底物的选择特异性，植物中的磷脂酶c又可分为磷脂酰肌醇特异性磷脂酶c（pi-plc，磷脂酰肌醇作为底物）和非特异性磷脂酶c（nonspecific phospholipase c，npc）。与pi-plc选择性地以磷脂酰肌醇为底物所区别的是，npc可以利用不同的磷脂作为底物，如磷脂酰胆碱(pc)、磷脂酰乙醇胺(pe)和磷脂酰丝氨酸，产生sn-1，2-二酰基甘油(dag)和相应的磷酸酯组。
人们对动植物中pi-plc的生化特征、蛋白功能和信号传导等研究较为清楚；pi-plc 水解pip2（phosphatidylinositol4,5-bisphosphate），产生ip3和 dag，二者调控下游信号转导和细胞应答[3]。植物npcs如何应答外界刺激并调控细胞应答，及其可能的分子机理，却知之较少。与pi-plc相比，npc蛋白具有不同的生化特征。譬如，npc并不水解pip2，而偏好以pc、pe和lysopa等脂类为底物[4]；其活性不依赖于钙离子[5-6]。因此，npc可能参与调控与pi-plc截然不同的信号过程和生物功能。
拟南芥npc基因家族由6个亚型组成，分别是npc 1、npc 2、npc 3、npc 4、npc 5和npc 6。npc 4被发现是一种质膜结合蛋白[4、7]。npc4和npc 5可以水解pc，但npc 5的水解活性比npc 4低40倍[8]。reddy等人描述npc3是一种具有溶血磷脂酸性磷酸酶活性而不是plc活性的酶[6]。尚未进行实验表征的npc1、npc 2和npc 6含有假定的n-末端信号肽，它们定位于内膜和特定细胞器[9]。最近的研究表明，npc作为植物代谢的中介物质在磷脂-二半乳糖基 dag交换方面[4、8]，和与激素信号传递有关的生长和发育方面[10-11]，以及对不断变化的环境条件胁迫的应对[12-16]等方面发挥了重要作用。
2. 研究的基本内容和问题
研究目标：利用生理、细胞和分子遗传等多种手段，揭示在外界胁迫下，npc如何结合、调控pin4蛋白，进而调节生长素的极性分布、根发育和植物抗逆。
研究内容：1、npc3基因的克隆。
2、在蛋白水平明确npc3的表达。
3. 研究的方法与方案
研究方法：本实验以拟南芥为主要材料。
1、pcr克隆npc3/4/5基因。核酸胶检测其分子量大小。
2、利用 gfp 抗体在蛋白水平明确npc3的表达模式。
4. 研究创新点
已有研究表明，拟南芥npc3可能参与生长素信号过程。但是，植物npcs如何调控生长素信号及其在胁迫应答中的分子功能，仍然不是很清楚。pins介导的生长素极性运输、分布参与调控植物生长、发育和胁迫应答，并受pins磷酸化水平和膜脂的调控；但npcs是否直接结合、调控pins，至今尚无报道；而且，细胞水平npc与pins的互作，是否调控植物应答外界胁迫，仍不清楚。
本项目的实施将从外界胁迫、激素信号转导以及脂蛋白互作等不同层面，研究生长素调控植物发育和应答胁迫的分子基础，重点阐明脂信号介导的生长素调控植物应答盐害的分子机制，达到深入认识植物生长发育基本规律。
5. 研究计划与进展
研究计划：
2018.09~2018.10利用pcr对npc3基因进行基因克隆。
2018.10~2018.11利用gfp抗体对npc3进行表达分析。
