枯草芽孢杆菌Ffh蛋白在大肠杆菌中的重组表达开题报告

 2022-02-07 20:47:07

1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)

1.研究意义

多聚谷氨酰胺疾病(polyglutamine disease, polyq disease)是由于编码区cag重复序列编码多聚谷氨酰胺导致的,目前这类疾病包括常染色体显性遗传共济失调,以及huntington舞蹈病(huntington disease,hd)和延脊肌萎缩症(spinal and bulbar muscular atrophy,kennedy'ssyndrome,sbma)。

然而,在医学上对于此类疾病缺乏有效治疗手段,但是可以从线虫上构建相应的模型来提供一些新的研究方法。

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2. 研究的基本内容和问题

1.目标:

1)在不同的大肠杆菌菌板上培养q40线虫

2)能够一次性在一个大培养皿上收集到1g的线虫

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3. 研究的方法与方案

1.研究方法:

用秀丽隐杆线虫来表达polyq和黄色荧光蛋白(polyq-yfp)的嵌合融合体,构建一个简易的模型。前人已经从病理学等多个角度寻找相关的抑制polyq蛋白的毒性,换个思路:从菌群基因构成对q40线虫寿命的影响来找到相关的抑制机制。首先进行预实验从大肠杆菌菌库中挑选出对q40线虫寿命有影响的大肠杆菌,用这些大肠杆菌分别喂养q40线虫,然后进行收集,收集后的线虫送去公司对转录组测序,比对转录组序列,得到转录组上的差异,进而分析有哪些基因可能对polyq蛋白的毒性有影响。

2.技术路线:

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4. 研究创新点

从肠道菌群基因构成的角度来分析其对多聚谷氨酰胺疾病的影响,对于后续多聚谷氨酰胺疾病的治疗有非常重大的意义。

5. 研究计划与进展

2020.4 -2020.5用基因构成不同的大肠杆菌喂养构建好的q40线虫,达到一定数量后送去专门的公司进行转录组测序,进而进行比对

2020.6 根据比对结果来寻找是否存在某些基因表达量上的差异,在从这些基因上来解释q40线虫寿命的变化和对polyq毒蛋白的抑制机制

以上是本课题的大致安排,工作的重点还将根据实验的具体进展情况进行适当调整

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