1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
肺炎克雷伯杆菌（klebsiella pneumoniae）是一种条件致病菌，可引起急性的人畜共患传染病，如败血病，急性肺炎，尿路感染等[1, 2]。
目前对于肺炎克雷波杆菌的感染，仍多采用抗生素治疗，随着这些抗生素的使用，出现了大量耐药性菌株，对医疗和人类健康带来极大威胁[3]。
临床分离的肺炎克雷伯杆菌获得耐药性通常是因为其可以合成使抗生素失活的酶，目前发现的主要包括β-内酰胺酶、氨基钝化酶等。
2. 研究的基本内容和问题
1. 研究目标本研究项目旨在通过对肺炎克雷伯菌a1806的噬菌体进行生物学特性分析，鉴定其作用受体，为改进噬菌体疗法、研发噬菌体制剂奠定一定理论基础。
2. 研究内容（1）以肺炎克雷伯菌a1806为宿主菌株，采用双层平板法从污水中分离纯化相应的噬菌体，建立针对该菌株的噬菌体库，从中选取典型的一株噬菌体对其生物学特性如吸附率、最佳感染复数、一步生长曲线、温度和ph敏感性、对宿主菌生物膜的裂解能力等进行分析。
（2）建立转座子插入的接合子库，筛选肺炎克雷伯菌a1806的噬菌体抗性突变株，确定突变位点，从而鉴定噬菌体裂解宿主菌的相关受体，并通过同源重组法构建该位点的插入突变株，分析噬菌体感染与抗性机制。
3. 研究的方法与方案
研究方法及路线：1. 分离噬菌体，分析噬菌体的生物学特性。
采集医院附近河流或生活污水，以肺炎克雷伯菌a1806为宿主菌株，通过双层平板法分离纯化噬菌体，富集并记录各噬菌体滴度，保存于sm缓冲液中。
选取形态典型的噬菌体分析其生物学特性，通过双层平板法测定吸附率、最佳感染复数、一步生长曲线、温度和ph敏感性等特性，通过结晶紫染色测定吸光度法分析其对宿主菌生物膜的裂解能力。
4. 研究创新点
本项目选取临床上分离的一株产ndm-1的肺炎克雷伯杆菌a1806，其研究结果对于将噬菌体疗法应用于临床上已产生耐药性的肺炎克雷伯杆菌感染有较强的针对性和实际意义。
噬菌体受体是其侵染宿主菌的第一道门槛，通过鉴定噬菌体受体，可以更透彻地了解噬菌体与宿主菌的相互作用，为后续研究及其应用奠定了理论基础。
项目中利用转座子插入法构建抗噬菌体菌株，其随机性较大，再利用随机pcr等方法，可在短时间内确定突变位点和受体。
5. 研究计划与进展
2017.8-2017.9 采集水样，分离纯化噬菌体。
2017.9-2017.11 选取一株典型的噬菌体，分析各项生物学特性。
2017.9-2017.12 建立转座子插入的接合子库，筛选肺炎克雷伯菌a1806的噬菌体抗性突变株，鉴定噬菌体裂解宿主菌相关的受体。
