SmETR2基因的克隆及其在盐胁迫下表达模式分析开题报告

 2022-02-08 20:10:02

1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)

1. 本课题的意义随着社会经济发展、人口增加及自然气候条件的恶化,水资源短缺、土壤次生盐渍化的趋势将日益加剧,土壤盐渍化已成为一个世界性难题[1], 高盐胁迫不仅影响植物离子和渗透平衡,破坏其细胞膜系统,还降低光合速率,减少蛋白质、糖等物质的合成,影响植物的生长发育,造成植株矮小,营养生长期和开花期明显缩短,甚至导致死亡[2]。

因此研究植物的耐盐性机理对于农业的可持续发展具有重要意义。

植物体在胁迫条件下本身能通过相应特定基因的表达来适应这种胁迫条件,且在应答过程中会有多种植物激素参与,包括脱落酸、乙烯、茉莉酸、生长素、赤霉素等。

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2. 研究的基本内容和问题

研究目标:本课题以我们实验室前期研究发现的茄子miRNAm0001的靶基因茄子乙烯受体SmETR2为研究对象,克隆基因全长,分析其组织表达和盐胁迫、乙烯处理下的表达模式,初步了解SmETR2在耐盐中的作用。

研究内容:1、乙烯受体基因SmETR2全长序列的克隆及生物信息学分析2、乙烯受体基因SmETR2在茄子中的表达模式3、在盐胁迫、乙烯处理下乙烯受体基因SmETR2的表达模式拟解决的关键问题:获得SmETR2基因,初步揭示其与耐盐的关系。

3. 研究的方法与方案

研究方法、技术路线、实验方案1、植物材料与准备茄子品种为苏琦1号(solanum melongena l. cv. suqi),种子购自江苏省农科院,为当地普遍种植品种。

挑选饱满的茄种,将其浸泡于1mg/ml的ga3中,37℃保温两天后,用纱布去除种子表面的粘液,用蒸馏水冲洗几遍后,再在37℃的蒸馏水中保温一天,浸泡后的茄种用蒸馏水冲洗3遍,待茄种解除休眠后,用75%的酒精表面消毒30 s;弃去酒精,再用10%的naclo溶液消毒15min;弃去naclo溶液,用无菌水清洗3-5次;将茄种放在无菌滤纸上吸干种子表面的无菌水,接种于含有200mgl-1cef的固体ms培养基中。

在282℃黑暗环境下培养5d,发芽后置于28℃、16 h光照,20℃、8 h黑暗条件下培养。

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4. 研究创新点

利用分子生物学方法首次在茄子中克隆乙烯受体基因SmETR2,初步揭示其在响应盐胁迫过程中发挥的作用。

5. 研究计划与进展

2017年10月-2017年12月 :主要对smetr2进行生物信息学分析、克隆smetr2全长序列、及无菌栽培茄子苗。

2018年3月-2018年4月:1、对处理后的茄子苗进行组织取样,采用半定量rt-pcr进行smetr2的组织表达分析。

2、对茄子苗进行盐胁迫处理与乙烯处理,采用荧光定量pcr进行smetr2的表达分析。

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