1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
1本课题研究意义 1．1半胱氨酸蛋白酶抑制剂（cystatin）是重要的肿瘤标志物半胱氨酸蛋白酶广泛存在于细胞内外并调节各种细胞内蛋白质周转、免疫反应、骨重塑等重要的生物学功能，同时半胱氨酸蛋白酶抑制剂( cystatins) 能抑制其活性，它们之间的表达不协调可能会减弱免疫细胞功能致使肿瘤的发生、发展。
[1]此外，cystatin家族的多种成员可以作为癌症标志物。
例如，在胰腺癌最新研究表明[2]，cystatin sn 在胰腺癌组织及细胞株高表达，在促进癌细胞增殖方面有重要作用，也许是潜在的可以作为检测早期胰腺癌的肿瘤标志物。
2. 研究的基本内容和问题
研究的目标、内容和拟解决的关键问题1.1研究目标(1) 免疫小鼠，制备茶树cystatin抗体；(2) 对制备的抗体进行纯化，以提高其效价，使得抗体利于后续实验使用。
1.2研究内容(1) 原核表达并纯化茶树cystatin蛋白；(2) 用茶树cystatin蛋白定期注射小鼠腹腔，制备茶树cystatin抗体；(3) 茶树cystatin抗体过protein a resin进行亲和层析，以纯化抗体。
1.3 拟解决的关键问题(1) 如何在合适的免疫时期取得抗体；(2) 如何尽可能多的获得动物的抗血清；(3) 如何提高抗体的效价及纯度。
3. 研究的方法与方案
研究方法、技术路线、实验方案及可行性分析2.1研究方法(1) 抗原制备及纯化(2) 抗原-福氏佐剂混悬液的制备 (3) 免疫及抗体的收集(4) elisa检测效价(5) 抗体纯化(6) 抗体sds-page检测2.2技术路线抗原制备及纯化→抗原-福氏佐剂混悬液制备→免疫小鼠、制备抗体、收集抗体→抗体纯化→抗体效价检测→抗体条带大小2.3实验方案(1) 抗原的制备及纯化构建茶树cystatin原核表达模型，制备茶树cystatin蛋白，并过镍柱进行亲和层析，以纯化蛋白，作为抗原。
(2) 抗原-福氏佐剂混悬液的制备 用于免疫的纯抗原(每只小鼠用量为20~100μg，若抗原的免疫原性较强的可减少免疫量)溶于0.1~0.2 ml 0.1m pbs中, 加1~5倍体积的福氏佐剂, 并使之充分乳化，作为第1次免疫原。
以后各次均为抗原加福氏不完全佐剂作为免疫原。
4. 研究创新点
特色或创新之处用茶树Cystatin蛋白作为抗原免疫小鼠制备抗体，对抗体进一步纯化，使其效价提高，纯度提高，这对于抗体的后续研究使用具有重要作用。
若通过此方法制备出高效价、高纯度的抗体，这将为实验室抗体库增加一位新成员。
5. 研究计划与进展
研究计划及预期进展2016年8月-10月原核表达制备茶树cystatin蛋白，并对其纯化，作为抗原。
饲养小鼠。
2016年10月-12月制备抗原-福氏佐剂免疫悬液，免疫小鼠。
