1. 研究目的与意义
1.研究背景 1.1.癌症 癌症,因其高发病率和高死亡率,严重危害人民群众的身心健康。仅以乳腺癌为例,我国每年大约新增乳腺癌患者27.9万例,位居女性肿瘤发病率首位。虽然乳腺癌患者的5位存活期已提升至80%左右,但与欧美发达国家相比,仍有较大的提升空间。因此,深入研究了解乳腺癌中的原癌基因及其作用机制,有利于新型抗乳腺癌药物和治疗手段的开发。 1.2.RSK2 核糖体S6激酶2(Ribosomal S6kinase, RSK2),属于Ras-MAPK下游通路的90kDa的RSK家族,RSK2被磷酸化后,被转入到细胞核中磷酸化多种核蛋白,参与调控细胞的增殖、周期、转化等过程。大量研究表明,RSK2在多种恶性肿瘤及组织中较正常细胞及组织明显偏高。但其在乳腺癌中的作用机制尚不完全清楚。 1.3.上皮间质转化(EMT) 上皮-间质转化(EMT)机制一直以来都是探讨恶性肿瘤转移的热点话题。EMT 在 1982 年被首次报道,Greenburg等在体外试验中证实在特定的生理、病理状况下,上皮细胞会暂时失去极性,表现出间质细胞所具有的迁移特征,即上皮细胞出现细胞极性丧失、黏附能力下降及细胞拉长等间质表型特征。研究表明,EMT与乳腺癌的侵袭转移显著相关,乳腺癌细胞通过 EMT 获得转移迁移能力,侵袭周围或远处组织,成为转移性肿瘤。因此研究RSK2对乳腺癌细胞EMT过程的调控机制,将为针对EMT靶向治疗提供新的理论基础。
2.研究目的及意义 本实验的研究目的是研究RSK2调控乳腺癌细胞EMT过程的作用机制,为目前乳腺癌的治疗手段及相关药物的开发探寻新的靶标和思路。
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2. 研究内容和预期目标
2.1.主要研究内容
本论文采用rnai、western blot、细胞转染等技术和方法,以乳腺癌细胞系mcf-7为对象,检测rsk2对akt通路的调控机制。
3. 研究的方法与步骤
3.1. 研究技术: RNAi、细胞转染、western blot、基因芯片等。
3.2. 步骤: 1) 设计合成RNAi载体; 2) 用脂质体包裹的方法将载体转染进入乳腺癌细胞株MCF-7; 3) 用G418对转染细胞进行筛选,得到稳定转染细胞株; 4) 进行transwell实验; 5) 裂解蛋白,western blot检测RSK2、AKT、p-AKT等蛋白含量变化。
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4. 参考文献
1. 陈菊英. 紫草素通过PI3K/Akt通路促进人乳腺癌MCF-7细胞自噬Shikonin promotesautophagy of MCF-7 human breast cancer cells through PI3K/Akt pathway[J]. 中国药理学通报, v.29(2):194-198. 2. 马艳, 刘虹, 张浩, et al. TGF-β信号通路调控乳腺癌上皮-间质转化的研究进展[J]. 药学学报, 2015(4):385-392. 3. 齐世美, 吕俊, 孟宇,等. 七叶皂苷钠通过抑制AKT, ERK上游信号SRC活性诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡[J]. 中国中药杂志, 2015,40(16):3267-3272. 4. 周炳刚, 魏昌晟, 张颂,等. 苦参碱逆转人乳腺癌MCF-7/ADR细胞株耐药性及对PI3K/AKT信号通路下游因子的影响[J]. 现代肿瘤医学(1):14-18. 5. 闫雷, 陈昌杰, 杨清玲. 非编码RNA在乳腺癌上皮间质转化中的相关研究[J]. 蚌埠医学院学报, 2019(9). 6. 陈康杏, 王籽又, 黄燕霞, et al. RSK2与恶性肿瘤的关系及其抑制剂的研究进展[J]. 中国病理生理杂志, 2015, 31(10):1772-1779. 7. 金圣华, 刘学军, 张礼. Affymetrix基因芯片原始数据噪声分析与应用[J]. 中国生物医学工程学报, 2010, 30(3):382-387. 8. Huynh M M , Jayanthan A , Pambid M R , etal. RSK2: a promising therapeutic target for the treatment of triple-negativebreast cancer[J]. Expert Opinion on Therapeutic Targets, 2019. 9. Qiu Q , Jiang J , Lin L , et al. Downregulation of RSK2 influences thebiological activities of human osteosarcoma cells through inactivatingAKT/mTOR signaling pathways[J]. International Journal of Oncology, 2016. |
5. 计划与进度安排
1. 2022-2022-1学期第17-20周-2022-2022-2学期第1-2周 查阅文献,完成开题报告的撰写。设计合成rnai载体;
2. 第5-7周 转染mcf-7细胞;
3. 第8-9周 稳定筛选;
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