茶树菇多糖提取及抑菌活性的研究开题报告

1. 研究目的与意义

茶树菇（agrocybeaegirita），属真菌门、担子菌亚门、层菌纲、伞菌目、粪绣伞科、田菇属，是一种具有较高营养价值的珍稀食药用真菌，其子实体富含氨基酸、多糖、微量元素等多种营养成分。研究发现，茶树菇多糖是其中最主要的一类生物活性成分，由葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、甘露糖、鼠李糖、木糖等单糖构成。

茶树菇具有抗肿瘤、抗衰老、增强免疫、降低胆固醇等功效，药用价值较高。 此外有研究报道食用菌多糖具有抑菌功能。韦保耀等研究发现双孢蘑菇多糖对牙龈卟啉单胞、中间普雷沃菌、菊核梭杆菌都有一定的抑制作用，但抗菌活性低于合成的药物；白丹等采用纸片琼脂法测定了灵芝多糖对3种植物病原菌和5种食品有害菌的抑菌强度，结果显示，灵芝多糖对它们都有抑菌效果，但对细菌的抑菌活性强于真菌；刘莹等采用k-b法对褐蘑菇、滑子菇和香菇等三种食用菌多糖的抑菌活性进行研究，发现它们对大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌有抑菌作用，但效果远不及抗生素抑菌效果。茶树菇是集保健食疗于一身，被称之为“神菇”。有关其多糖的提取及在抗肿瘤、免疫等方面的研究已报道，但是茶树菇多糖是否和林芝、香菇等一样有抗菌活性，目前还尚未见有报道。

通过改造茶树菇菌种和优化培养基可以提高茶树菇多糖的产量，而优化提取方案可以提高多糖的提取效率，保证茶树菇胞内多糖被尽量完全的提取出来。多糖提取的方法很多，如：水提取法、碱提取法、酸提取法、酶解法、超声波辅助法、微波辅助法等。目前，研究较多的新型方法，如酶解法、超声波辅助法、微波辅助法等，虽然具有省时、节约溶剂、提取效率较高的特点，但是，超声波辅助法和微波辅助法对仪器的要求太高，且耗能多，目前主要是实验室小规模研究使用，而生物酶由于价格较昂贵也阻碍了其应用的广泛性。

超声波是频率高于20khz的机械波，它在媒质中传播时可产生空化现象，空化中产生的极大压力造成被破碎物在瞬间破碎，同时，超声波产生的振动作用加强了被破碎物的扩散及溶解。采用超声提取技术用于有效成分提取，具有简便快速、高效节能、重复性好、不影响提取物的活性等许多传统方法无法比拟的有点。

2. 研究内容和预期目标

（1）对茶树菇多糖的提取工艺进行优化。提取方法采用超声波辅助提取法，运用单因素实验和正交实验对提取工艺进行优化,得到提取率的最优条件；

（2）对茶树菇多糖的抑菌活性进行研究。可采用杯碟法、滤纸片法或比浊法等检测茶树菇多糖对细菌和真菌的抑菌效果，在合适浓度下抑菌圈大小。

3. 研究的方法与步骤

茶树菇干品用打粉机打粉→80目过筛→石油醚除脂（索式提取器）→烘箱烘干 备用

1、利用单因素试验分析超声波功率（40%、60%、70%、80%、100%）、超声波时间（10min、20min、30min、40min、50min）、料液比（1:15、1:20、1:25、1:30、1:35）、水浴温度（50℃、60℃、70℃、80℃、90℃）、水浴时间（30min、60min、90min、120min、150min）、ph（4.5、5.5、6.5、7.5、8.5）等因素对茶树菇多糖得率的影响；用苯酚硫酸法测总糖，dns法测还原糖；

将脱脂后的茶树菇粉末按一定料液比微微摇晃溶解后，用naoh或hcl调节ph值，在瓶口包上保鲜膜后放入超声波清洗机中进行超声，后转入水浴锅内进行热水浸提，4000r/min,15min 离心后取上清液进行测糖。

将茶树菇粗多糖提取液稀释100倍，取1ml于试管；另取1ml蒸馏水代替多糖提取液作为空白对照。然后加入5%苯酚水溶液0.5ml，加5ml浓硫酸，混匀，置于自来水冷却至室温，在最大吸收波长490nm下测定多糖提取液的od值。将od值带入标准曲线，算得总糖浓度。

将茶树菇粗多糖提取液稀释10倍，取1ml于试管；另取1ml蒸馏水代替多糖提取液作为空白对照。分别加入2ml3,5-二硝基水杨酸(dns)试剂进行反应，在100℃水浴加热5min显色后立即流水冷却，用纯净水稀释至12ml，混匀，在最大吸收波长540nm下测定多糖提取液的od值。将od值带入标准曲线，算得还原糖浓度。

多糖浓度（mg/ml）=总糖浓度（mg/ml）-还原糖浓度（mg/ml）

4. 参考文献

[1]董梦莹，尤佳，王菲，等.超声波辅助热水浸提茶树菇多糖工艺[j].食品研究与开发，2012，33（9）：12-14.

[2]辛英姬，方绍海，王筱凡，等.茶树菇多糖抑菌效果的试验[j].食用菌，2011，4：64-65.

[3]胡晓倩，唐洪华，程安阳.茶树菇多糖提取及其抗氧化性能的研究[j].湖北农业科学，2011，50(21)：4465-4468.

5. 计划与进度安排

1.1-4周：查阅文献，制定实验方案，撰写开题报告，学习软件使用；

2.5-6周：开始实验准备工作，进行预实验，熟悉实验方法；

3.7-10周：使用超声波辅助提取法从茶树菇子实体中提取胞内多糖，利用单因素试验和正交试验确定最佳的提取方法；