一、课题简介
海洋占地球表面积的71%,生物量约占地球生物总量的87%,生物种类20多万种,是一个巨大的天然产物宝库,丰富的资源有待于人们研究利用。相对于陆生生物物种天然产物开发利用的程度而言,海洋生物资源的开发利用程度还是相当低的。海洋生物生活在一个具有一定水压、较高盐度、较小温差、有限溶氧、有限光照的海水化学缓冲体系中.与环境因子的联系更为密切。由于生活环境的特殊性,海洋生物在新陈代谢、生存繁殖方式、适应机制等许多方面具有显著的特性,集中体现在机体内含有许多结构特殊的生命活性物质和代谢产物。海洋天然产物的特异结构和药理作用是陆源生物所无法比拟的,海洋药物具有显著的药理稳定性和强效性,毒副作用相对较小,对防治癌症、艾滋病、心脑血管病、老年病等疑难病症具有独特作用,已成为开发新药、特药的主要方向之一。
本课题拟通过培养分离得到的南极放线菌NPA-1,通过一系列的分离纯化处理发酵产物,检测各产物的抑菌活性,再通过液相跟踪检测分离得到的产物的纯度,最后鉴定得到的活性物质。
二、研究手段
1.实验器材
南极放线菌NPA-1、真空旋转蒸发仪、超净台、色谱分离柱、离心机、薄层板、高效液相色谱仪、大孔网状吸附树脂、实验室常用无机和有机试剂、仪器等。
2.实验方法
首先是对实验室保存的一株南极放线菌NPA-1的复活,通过摇瓶培养、平板划线、斜面培养等多种方法恢复其生长状态,获得单菌落。待其生长状态良好后,将其种子液接种到500ml发酵瓶中进行发酵近100h之后收集产物。通过过滤将菌液和菌体分开,菌液经大孔吸附树脂进行吸附;菌丝体则用乙醇保存至1000ml大烧杯中,60℃水浴过夜,通过3-4次5000r/10min处理至上清澄清,收集上清,通过悬蒸处理蒸出乙醇,得到菌体破碎产物,再加水溶解,同样经大孔吸附树脂处理,进行洗脱。
分别用水、10%乙醇、30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇和100%乙醇这六个梯度对大孔树脂进行洗脱,收集洗脱液,至颜色不再发生明显的变化即可更换洗脱梯度。对于收集得到的6个洗脱液分别进行悬蒸至接近蒸干,得到化合物组分,然后用甲醇溶解再进行收集。随后进行各个组分的抑菌试验,检测所得到的物质的抑菌活性。共需打9个孔,分别加上样浓缩液、水洗脱液、10%乙醇洗脱液、30%乙醇洗脱液、50%洗脱液、70%乙醇洗脱液、100%乙醇洗脱液、阴性对照(甲醇)、阳性对照(替加环素)。
