螺内酯片含量稳定性研究文献综述

螺内酯为一种低效利尿剂，其结构与醛固酮相似，为醛固酮的竞争性抑制剂，即盐皮质激素受体阻断剂，也作为治疗高血压的辅助药物。本课题所研究的螺内酯片（25mg）采用的是湿法制粒工艺，但其含量不稳定，进行稳定性试验，在加速6个月和长期6个月的含量测定试验中判断已不合格。因此，本课题研究的目的及意义是通过改进现有螺内酯片处方中的辅料种类及用量来改善螺内酯片含量不稳定的问题，选出适合的处方用于车间生产。

早有国内外的研究指出，螺内酯作为低效利尿剂，属于盐皮质激素的完全拮抗剂，用于治疗充血性水肿、肝硬化腹水、肾性水肿等水肿性疾病。本药有抑制排钾和重吸收钠的作用从而具有利尿作用。醛固酮的蛋白受体形式有两种构象形式，仅有一种能与醛固酮分子结合而有活性。螺内酯能与非活性构象形式的醛固酮受体键合，而阻止受体向活性构象翻转，从而抑制钠离子和氯离子的重吸收，同时大大减少水的重吸收，其主要作用部位在远曲小管和集合管，阻断Na＋-K＋和Na＋-H＋交换，结果Na＋、C1－和水排泄增多，K＋、Mg2＋和H＋排泄减少。

查看文献发现，某些疾病引发的体内局部醛固酮增多，醛固酮增多引发的病变往往加重病情或引发新的疾病。由于螺内酯为醛固酮受体拮抗剂，可以阻止这些情况发生而有助于治疗。国内外近十年的研究实验发现，对螺内酯的研究主要是以螺内酯为辅助药物研究其辅助作用。实验研究发现，螺内酯对肾小管以外的醛固酮靶器官也有作用，可有效抑制心肌肥厚、心血管纤维化和肾小管纤维化等病状发生，且对于已经发生这些病状的状况下也有较强的治疗作用。因此，螺内酯广泛用于肾血管性高血压、糖尿病、自发性及继发性高血压、心力衰竭等疾病治疗的辅助药，且与主药合用效果更好。

主要研究的内容

1、查看文献，改变处方中辅料的用量及辅料的种类，研究其对成品药物稳定性的影响，从而改善处方，使其适用于车间工艺生产。

2、确定处方后，进行小试，并做好小试过程中的各项检查。

3、对小试样品进行加速试验及长期试验，并通过高高效液相色谱法及分光光度法对试验前后的样品做含量测定及杂质检查等各项试验，以判断药品是否合格。

主要研究手段及研究方案

一、对成品的标准及检查试验方案：

定义：螺内酯片中螺内酯C₂₄H₃₂O₄S的含量应为标示量的95.0%—105.0%。放行标准为97.0%—105.0%。

性状、规格、片厚、直径、硬度、平均片重、重量差异、含量均匀度、崩解、脆碎度、贮存、微生物限度

鉴别：1、取本品片粉适量，相当于0.125g螺内酯，分两次每次用10ml氯仿提取，过滤，合并滤液并蒸干，用2.5ml氯仿溶解残渣。进行红外测定，并与螺内酯的标准图谱比较。

2、TLC法测定，GF254铺板。展开剂为水：环己烷：乙酸乙酯（1：24：75）。取下列溶液各5micro;l点样。溶液（1）：取本品片粉适量，相当于20mg螺内酯，用10ml二氯甲烷溶解。溶液（2）：取螺内酯对照品适量，用二氯甲烷溶解制成浓度为0.2% w/v的溶液。展板展开后取出于空气流中干燥，紫外灯254nm检测：溶液（1）中主斑点的位置和大小应与溶液（2）中的一致。

溶出度：步骤：取溶出滤液适量，根据需要用介质适当稀释，于紫外242nm测定吸光度值，A (1%, 1 cm)以445计，计算C₂₄H₃₂O₄S的溶出量。

限度：45min时，C₂₄H₃₂O₄S的溶出量不得低于标示量的70%。

有关物质：HPLC法测定。

供试液：取本品片粉适量，相当于螺内酯62.5mg，用25ml氯仿溶解，超声5min，振摇10—15min助溶，离心，过滤。将残渣中加25ml氯仿重复此操作，合并氯仿提取液，蒸干，用2.5ml四氢呋喃溶解，并用流动相稀释到25.0ml。

对照液（a）：取1.0ml供试液，用流动相稀释到100.0ml。

对照液（b）：取烯睾丙内酯对照品25.0mg，用1ml四氢呋喃溶解，并用流动相稀释到10.0ml。

对照液（c）：取1.0ml对照液（b），用流动相稀释到100.0ml。

对照液（d）：取1ml供试液和1ml对照液（b）混匀，并用流动相稀释到100ml。

对照液（e）：取0.5ml对照液（a），用流动相稀释到10.0ml。

流动相：乙腈：四氢呋喃：水（8：18：74）。

色谱系统：0.15mtimes;4.6mm含固定相5micro;m的C8柱；

检测波长：254nm，283nm； 流速：1.8ml/min。

取供试液、对照液（a）、对照液（d）以及对照液（e）各20micro;l进样，于254nm下记录图谱：保留图谱至螺内酯峰保留时间的2倍。供试液中除了螺内酯和烯睾丙内酯外所有峰的和不得超过对照液（a）中螺内酯的峰面积，限度为1.0%。丢弃峰面积小于对照液（e）中主峰面积的峰。

主要研究手段及研究方案

取供试液和对照液（c）各20micro;l进样，于283nm下记录图谱：供试液中烯睾丙内酯的峰面积不得超过对照液（c）中烯睾丙内酯的峰面积，限度为1.0%。 将283nm下测得的烯睾丙内酯的百分含量与254nm下测得的其他杂质的百分含量相加，总和不得超过1.0%。对照液（d）中应出现螺内酯和烯睾丙内酯两个峰，且分离度至少为1.4；对照液（e）中主峰的信噪比至少为6，否则测试无效。

含量测定：

取本品20片，称重研细。取相当于含25mg螺内酯的片粉，加100ml甲醇加热煮沸并搅拌使溶解。冷却，用甲醇稀释到250ml。取此溶液10ml，用甲醇稀释到100ml。于紫外238nm测定吸光度值，吸收系数E(1%, 1 cm)以470计，计算C₂₄H₃₂O₄S的含量。

二、进行加速试验和长期试验

加速试验：此项试验是在超常的条件下进行的，供试品要求3批，按市售包装，在温度为40℃plusmn;2℃、相对湿度75％plusmn;5%的条件下放置6个月。在试验期间第1个月、2个月、3个月、6个月末取样一次，按稳定性重点考察项目检测。

长期试验：长期试验是在接近药物的实际贮存条件25℃plusmn;2℃进行，供试品要求3批，市售包装，在温度25℃plusmn;2℃、相对湿度60％plusmn;10％的条件下放置12个月。每三月去一次样，分别于0个月、3个月、6个月、9个月、12个月按稳定性重点考察项目进行检测。12个月以后，分别于18个月、24个月、36个月仍需继续考察，取样进行检测。

三、处方工艺

原辅料：

螺内酯、预胶化淀粉、10％聚维酮K30、水液、薄荷、乙醇、乳糖(Fast Flow 100)、十二烷基硫酸钠、硬脂酸镁、交联羧甲基纤维素钠

工艺流程：

螺内酯 预胶化淀粉（过筛）→配料→湿法混合制粒→沸腾干燥→24目钢丝筛整粒 辅料（10％聚维酮K30、水液、薄荷、乙醇）→第一次混合 外加辅料（乳糖、十二烷基硫酸钠、预胶化淀粉、硬脂酸镁、交联羧甲基纤维素钠）→第二次混合（检验）→压片（检验）→包装（检验）

四、其他标准及检验

原辅料质量标准：颜色、有无异物、杂点数、性状、粒度等。

颗粒质量标准：颗粒外观（颜色、有无异物、杂点数）、鉴别、水分、含量。

片质量标准：外观、平均片重、片重差异、直径、厚度、硬度、含量均匀度、崩解时限、脆碎度、有关物质、溶出度、含量、生物限度。

包装质量标准：瓶装检测、外包材外观。

主要研究成果形式

1、小试样品加速试验及长期试验前后的性状、规格、鉴别、有关物质、片厚、直径、硬度、含量测定、平均片重、重量差异、含量均匀度、崩解、脆碎度及微生物限度的合格度。

含量测定的计算公式： （A_Ttimes;100%）/ (470times;100times;W_T /250times;5/50times;25)

有关物质：峰面积和限度值

2、中间产品的各项检验（外观、含量等）的合格度。

研究进度

1、3月2日-3月20日：查找文献确认课题并撰写毕业论文开题报告。

2、3月21日-3月31日：翻阅文献并修改毕业论文开题报告。

3、4月1日-4月15日：仔细阅读文献，做出毕业设计论文大纲。

4、4月15日-4月25日：阅读相关文献，理解并熟悉实验方案。

5、4月26日-5月10日：参与试验。

6、5月11日-5月30日：完成毕业论文初稿，且于5月30日前上传。

7、5月31日-6月13日：修改论文，完成毕业论文终稿。

文献综述报告

螺内酯是继血管紧张素转换酶抑制剂（ACEI）和beta;-受体阻滞剂（BRB）后，第三个能降低慢性心力衰竭（CHF）病人死亡率的药物。把醛固酮拮抗剂作为心力衰竭和心肌梗死后的强适应症推荐药物，螺内酯在心衰的治疗中起着很重要的作用。

螺内酯是盐皮质激素（如醛固酮）的完全拮抗剂，其螺内酯片的主要适应症有：1．水肿性疾病与其他利尿药合用，治疗充血性水肿、肝硬化腹水、肾性水肿等水肿性疾病，其目的在于纠正上述疾病时伴发的继发性醛固酮分泌增多，并对抗其他利尿药的排钾作用。也用于特发性水肿的治疗。2．高血压作为治疗高血压的辅助药物。3．原发性醛固酮增多症 螺内酯可用于此病的诊断和治疗。4．低钾血症的预防 与噻嗪类利尿药合用，增强利尿效应和预防低钾血症。临床上用于治疗与醛固酮升高有关的顽固性水肿，故对肝硬变和肾病综合征的病人较有效，而对充血性心力衰竭除非因缺钠而引起继发性醛固酮增多病人外，效果均较差。

螺内酯的化学名称：17beta; -羟基-3-氧-7alpha;-（乙酰硫基）-17alpha;-孕甾-4-烯-21-羧基gamma; -内酯。化学结构式：分子式C₂₄H₃₂O₄S，分子量416.57。本药的性状为白色片；有轻微硫醇臭，在氯仿中极易溶解，在苯或醋酸乙酯中易溶，在乙醇中溶解，在水中不溶。本品的熔点为203～209℃，熔融时同时分解。本品在空气中温度，室温放置7天未见变色，现仅只发现螺内酯可降解为坎利酮和二烯酮，降解在一般制剂中和化学纯产品中很少发生。据测定，在46℃条件下放置5年，只有1%或更少的坎利酮生产。

本品的合成是以17alpha;-乙炔基-5-雄烯-3beta;, 17beta;-二醇为原料，经格氏反应引入羰基，然后以钯碳-碳酸钙为催化剂，选择性还原炔键为烯键，再经盐酸处理生成不饱和内酯环。该内酯环中的双键经钯碳很容易地被再次还原。经沃氏氧化后，再用DDQ氧化在6、7位引入双键，然后和硫代乙酸反应而制得。

本药有抑制排钾和重吸收钠的作用从而具有利尿作用。药物作用于远曲小管和集合管，阻断Na -K 和Na -H 交换，结果Na 、C1-和水排泄增多，K 、Mg2 和H 排泄减少，对Ca2 和 的作用不定。醛固酮的蛋白受体形式有两种构象形式，仅有一种能与醛固酮分子结合而有活性。螺内酯能与非活性构象形式的醛固酮受体键合，而阻止受体向活性构象翻转，从而抑制钠离子和氯离子的重吸收，同时大大减少水的重吸收。由于本药仅作用于远曲小管和集合管，对肾小管其他各段无作用，故利尿作用较弱，是低效利尿剂。另外，本药对肾小管以外的醛固酮靶器官也有作用。本药的作用特点是作用弱，起效慢，作用时间长。

赵喜等研究说明醛固酮受体拮抗剂和ARB 均能减少胶原纤维合成, 抑制心肌纤维化形成，减少胶原合成, 减轻心肌胶原堆积, 从而有效改善心肌的纤维化。糖尿病患者的高血糖状态使 RAAS 被激活，RAAS的激活与糖尿病心肌病变有着直接关系。并且有研究证明醛固酮可以激活 PI3K/Akt 信号通路，使用抑制剂可以使醛固酮诱导的细胞肥大明显减轻。付兴根的研究表明螺内酯治疗后使 p-Akt( Ser473 ) 蛋白的表达下调，可能是通过上调 PTEN 的表达，增强对 Akt 磷酸化的抑制作用，从而发挥其减轻心肌肥大的作用。他还得出结论，使用螺内酯可明显减轻心肌病变的发生发展；螺内酯可能通过抑制 2 型糖尿病大鼠心肌组织中 PTEN mRNA 及蛋白的表达降低，抑制p-Akt蛋白表达升高，从而抑制 PI3K/Akt 信号通路活性，发挥其对 2 型糖尿病大鼠心肌病变的保护作用。有研究证实醛固酮在慢性肾脏病进展中发挥致病作用, 醛固酮可以不依赖于肾素-血管紧张素而作为独立致病因子促进肾脏纤维化的发生和发展, 醛固酮受体拮抗剂能减轻、延缓肾脏的损害。费沛等实验中糖尿病大鼠Ccr 升高, 尿蛋白排泄增多, 并出现小管间质损伤, 螺内酯能减少尿蛋白水平, 减轻小管间质损伤, 提示阻断醛固酮的作用对糖尿病肾小管间质具有保护作用。有研究还发现ALD 诱导心肌肥厚的作用不依赖于血压的升高，且ALD 通过与其受体结合, 促进心肌蛋白质的合成。也有研究表明, ALD 促进心肌肥厚的电生理基础之一是影响钙通道。常连庆等研究表明螺内酯抑制肾性高血压心肌肥厚的机制与其下调心肌胞浆中CaN 表达及其活性有关。醛固酮可引起自主神经功能失调、参与高血压的发生发展、参与心血管重构、血管再狭窄及促进心肌细胞凋亡等。邓次妮等表明螺内酯具有明显的抑制血管重构的作用。螺内酷还可用于治疗水肿、腹水等疾病，机制螺内酯结合到胞质中的盐皮质激素受体, 阻止醛固酮一受体复合物的核转位, 产生拮抗醛固酮的作用。

查阅众多文献，得知螺内酯为辅助药物与其他主要治疗药物合用可得到良好疗效，特别是糖尿病、心脏病和心力衰竭等高死亡率疾病中有良好效果。因此，研究人员对于螺内酯药物应用的研究越来越重视。

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