1. 研究目的与意义
植物体细胞胚是指在植物组织培养中起源于一个非合子细胞、经过胚胎发生和胚胎发育过程产生的具有双极性的结构。
植物体细胞胚具有数量多、一旦形成能快速发育成再生植株等特点,被应用于快速繁殖种子来源困难的林木,如已有比较成熟的杂交鹅掌楸体胚发生技术。
aba即脱落酸,是一种具有全面生理功能的植物激素,有促进脱落、抑制生长、促进休眠等作用,同时在植物体细胞发生过程中有重要作用,对体细胞胚胎正常发育,体细胞胚内源aba含量,体细胞胚内含物等均有影响。
2. 国内外研究现状分析
国内针对aba对植物体细胞胚胎发育影响的报道很多,主要有aba对体细胞胚胎发生发育的影响,发现高浓度aba似乎起抑制作用,低浓度aba似乎起促进作用,且不同的植物种类对aba浓度的反应不同,aba单独使用有可能不能促进体细胞胚发生,反而抑制(高述民,李凤兰,2002)。
aba对植物体细胞胚胎发生中的调控作用,如促进细胞再分化,改善愈伤组织的状态,诱导结构致密的胚性愈伤组织发生。
在体胚发育过程中,aba能促进体胚的成熟,抑制体胚的过早萌发,并可抑制畸形胚的产生(霍妙娟,胡家金等,2007)。
3. 研究的基本内容与计划
一、两个杂交鹅掌楸基因型(154102、155202)在z14体胚诱导培养基aba浓度梯度0,1,2,4,8 mg/l进行体胚发生。
第一批材料 2018.11-2018.1211.06下液体:1. 准备工作:提前灭好三角瓶和量筒 2. 基因型154102、155202 各下2瓶,共4瓶3.培养基m134.操作时围绕着不要污染这一要点,如不从开着的皿上过、不从开着的瓶口上过、不同基因型必须换镊子操作等,愈伤在瓶壁上轻轻撵开。
11.13液体继代:1.准备工作:提前灭好三角瓶和量筒2.培养基 m133.操作时切忌污染,沉淀时间不宜过长(过长会导致细胞缺氧),并且在倒悬浮液的时候动作要快11.20过筛:1.准备工作:提前灭好筛子、漏斗、大皿2.培养基z363.操作时注意在工作台内拆开筛子、漏斗时不可以直接接触以免污染11.22铺平板:1.准备工作 提前灭好三角瓶、棉花、枪头、滤纸(烘箱烘干) 2.培养基z14(aba浓度0,1,2,4,8mg/l) 3.同一基因型混合成一瓶,吸取细胞前混匀,不能长时间静置,操作时不同基因型及时更换枪头,不可直接从开着的皿、瓶口、滤纸上经过。
4. 研究创新点
从不同浓度梯度研究ABA对杂交鹅掌楸体胚发生的影响,同时结合畸形胚的表型观察。
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