树脂固定化植物酯酶的初步研究开题报告

1. 研究目的与意义

植物酯酶来源丰富，取材方便，制备简单，可利用植物酶中的植物酯酶的抑制技术测定果蔬中有机磷和氨基甲酸酯类农药。酶液不易保存，适用范围有限，而固定化酶相对于游离酶则更稳定，更以保存，因此可选择固定化酶来进行相应的研究。本实验利用离子交换树脂为载体，通过研究植物酯酶固定化效果的重要影响因素，如吸附量、吸附pH、吸附时间、温度等，并将其和游离酶进行比较，可为植物酯酶的广泛应用提供相关科学依据。

2. 国内外研究现状分析

国内同类研究状况

国内对以树脂为载体的固定化酶进行了很多研究，如固定化果胶酶、果糖转移酶网、乳糖酶、氨基酞化酶、胰蛋白酶、蛋白酶、d-因酶、木聚糖酶以及脂肪酶等。艾志录等以树脂为载体对木聚糖酶进行了固定化，从而筛选出固定化效果较好的724和d380两种树脂；对含伯氨基的离子交换树脂d380采用戊二醛进行交联固定化，研究并优化了其固定化的相关条件。

纪淑娟等用饱和度为30%和70%的硫酸铵将辽春10号小麦粗酶液分段盐析，然后用透析袋透析，最后再用凝胶柱层析，测定各阶段的胆碱酯酶活性和蛋白质含量，并对其比活力进行计算。结果表明，经各阶段纯化处理后的粗酶液中的胆碱酯酶均得到一定程度的纯化。与粗酶液相比，三个阶段的比活力分别提高了2.58倍、3.66倍和16.59倍。

3. 研究的基本内容与计划

研究内容：

1、选用d061和d296树脂固定胆碱酯酶，分别测定不同温度、ph值、时间和加酶量条件下固定化效果。

2、比较游离酯酶和固定化酶的酶学性质，最适温度、ph，表观米氏常数，最大酶促反应速度。

4. 研究创新点

比较用戊二醛进行改性时间的不同对固定化效果的影响，确定最优的改性时间；

探索除了戊二醛以外的其他交联剂对固定化效果的影响，为交联剂的选择提供了更广的范围；

探讨影响树脂固定化植物酯酶效果的其他重要因素，如高温、极端ph条件等。