1. 研究目的与意义(文献综述)
糖基化是真核生物蛋白质最普遍的翻译后修饰之一[1,2]。聚糖即糖基化过程中形成的多糖,在众多生物进程中,如细胞的生长与发育、细胞内和细胞间的信号传导以及肿瘤的生长和转移,有着至关重要的作用[3,4]。聚糖是一种重要的疾病标记物,与多种疾病,如癌症、炎症以及退行性疾病等密切相关[5]。因此,聚糖检测是分析糖基化过程、了解糖基化功能的决定性的因素。
质谱法因高灵敏度和能提供构信息等优点[6],已经成为聚糖分析的有效工具。目前用于糖链分析的离子源主要是电喷雾电离(electrospray ionization,esi)和基质辅助激光解吸电离(matrix-assistedlaser desportion ionization,maldi),这两种独特的软电离方式使得在pmol(10-12mol)和fmol(10-15mol)水平上精确分析生物大分子成为现实[7-8]。
esi的基本原理是分析物液体通过毛细管或喷雾针导入电离源内,在喷针与源内毛细管终端之间的强电场作用下(通常有数千伏电位差),分析物液体雾化成细小的带电液滴,这些带电液滴定向飘移的同时,干燥气流使液滴中的溶剂迅速蒸发,随着溶剂的蒸发,液滴表面的电荷密度增大,直到电荷之间的库仑排斥力和液滴表面张力的raleigh极限值相等,液滴发生“爆裂”,再次达到raleigh极限,再次“爆裂”,如此循环,形成带电粒子并进入气相,使分析物离子化。esi产生的主要为多电荷离子,因此降低了分析物离子的质核比,扩展了分子量分析范围。esi一般不采用负离子的检测模式,这是由于在负离子的检测中易产生放电现象,因此离子化效率较低。
2. 研究的基本内容与方案
2.1研究(设计)的基本内容
1、利用含氟衍生试剂标记糖链并优化衍生条件并进行质谱检测技术;
衍生化试剂:
3. 研究计划与安排
第1 ——3周:查阅相关文献资料,明确研究内容,了解研究所需药品、仪器。确定方案,完成开题报告。
第4 ——7周:确定所需麦芽七糖最低浓度并完成衍生条件的优化。
第7 ——9周:完成pngase 酶切蛋白酶实验并对聚糖进行衍生化实验。
4. 参考文献(12篇以上)
[1] yuan t, yong z, sarah e, etal. solid-phase extraction of n-linked glycopeptides.[j]. nature protocol,2007, 2(2):334-9.
[2] ito h, kameyama a, satot, et al. molecular-weight-tagged glycopeptide library: efficient constructionand applications.[j]. journal of the american chemical society, 2005,44(29):4547-9.
[3] ying z, meng y, cheng z, et al. highly selective and ultrafast solid-phase extraction of n-glycoproteome by oxime click chemistry usingaminooxy-functionalized magnetic nanoparticles.[j]. analytical chemistry, 2014,86(15):7920-7924.
