1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
课题的意义:内生菌泛指一切生活在植物体内的真菌及细菌等微生物[1]。
禾本科植物内生真菌普遍存在于植物各种组织、器官和细胞间隙内,与宿主之间建立了紧密的生态关系,产生的次生代谢产物对提高植物对各种生物和非生物胁迫的抵抗能力发挥着重要的作用[2]。
本课题主要是进行内生真菌的检测、分离培养以及利用前人的pcr引物研究我国内生真菌分离菌株中nrps基因分布和特征。
2. 研究的基本内容和问题
研究目标和内容:本研究以epichlo属内生真菌为实验材料,并利用3对特异性引物对我国原产的禾本科植物内生真菌菌株中进行广泛的检测,分析其在禾本科植物内生真菌中的分布情况。
之后,再对禾本科植物内生真菌进行dna特异性检测,为以后进行筛选新型抗生素和其他生理活性物质提供重要的理论依据。
拟解决的关键问题:禾本科植物内生真菌生长速度慢,一般在最适温度下培养3周,才能形成直径10~20毫米的菌落,培养足够的菌丝体获得dna需要的时间长,提取过程繁琐,这大大限制了对其生物学特性的研究,因此我们需要更简便更高效的dna提取方法。
3. 研究的方法与方案
研究方法:禾本科植物内生真菌的检测方法,目前主要包括孟加拉红染色光学显微镜观测法、酶联免疫分析、近红外反射光谱分析等。
本实验主要采用孟加拉红染色显微镜观测法。
禾本科植物内生真菌的分离,取植物体子座、茎秆、穗轴或者叶鞘为分离材料,依次经过75%的酒精、1%naclo、75%的酒精、无菌水表面消毒后,置于pda平板上25℃进行培养。
4. 研究创新点
(1)研究对象新颖。
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本实验的研究对象的是本实验室发现且亚洲特有的禾本科植物。
5. 研究计划与进展
2015年7月-8月:进行禾本科植物内生真菌的检测、分离9月-11月:进行禾本科植物内生真菌的纯化、培养11月-2016年4月:进行禾本科植物内生真菌DNA提取、测序
