1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
乙型肝炎病毒（hbv）感染是世界性的卫生难题，全世界大约有3.5亿乙肝慢性携带者，在我国尤其严重，目前我国仍有约1.2亿hbv携带者，携带率高达10.34%，几乎占全世界总数的一半，他们中的四分之一最终将发展成慢性肝炎、肝硬变甚至发展为原发性肝癌。
40%携带乙肝表面抗原的母亲，将通过母婴垂直传播，使大量的新生儿成为慢性乙肝病毒携带者。
hbv是一种dna病毒，属于嗜肝dna病毒科。
2. 研究的基本内容和问题
研究目标：本课题希望通过对相关细胞模型的研究，进一步核实egcg对hbv复制的抑制作用，并探究egcg抑制hbv复制的可能分子机制。
研究内容：本课题以人的肝脏来源的细胞系hepg2.2.15细胞(稳定转染hbv的hepg2细胞）、hepg2细胞、huh7细胞为模型，研究稳定转染hbv和瞬时转染hbv的细胞经过egcg处理后， hbv复制的情况，内容包括：1、细胞系的培养：hepg2.2215细胞、hepg2细胞、huh7细胞；2、将含hbv基因的质粒转染进入hepg2和huh7细胞；3、egcg处理细胞；4、收集细胞进行hbv病毒基因组的提取，进行实时定量pcr（real-time pcr）检测其病毒拷贝数；5、收集细胞培养液上清，进行酶联免疫吸附反应（elisa），检测hbv抗原（hbsag和hbeag）的表达水平。
6、western blot的方法检测自噬标记分子lc3ii和pi3k-akt-mtor信号通路的表达情况。
3. 研究的方法与方案
研究方法：一、hepg2.2.15细胞是hbv稳定整合的肝癌细胞,可以稳定地进行hbv基因组复制和表达，并且能分泌hbeag、hbsag，一方面实验通过培养hepg2.2.15细胞，并用egcg处理细胞培养适当时间，通过realtime pcr方法检测hbv的复制拷贝数；同时收集细胞培养液上清，通过酶联免疫吸附反应检测hepg2.2.15细胞中hbv基因的表达情况。
比较egcg处理组和对照组hbv在复制和表达方面的差别，探究egcg处理对hbv复制的影响。
二、hepg2、huh7细胞均是人来源的肝癌细胞系，通过将含有hbv基因的质粒分别瞬时转染进入这两种细胞，同上方法检测所转染的hbv质粒在细胞中的复制和表达的情况，进一步证实egcg抑制hbv复制的作用。
4. 研究创新点
egcg的抗病毒作用已经很明确，人们对于它对不同病毒的拮抗作用机制也有了一定的研究，egcg对hbv的抑制作用也已经有报道，参考文献中许君等的研究报道了egcg对hbv转录表达方面的作用机制，但是egcg对hbv的复制的影响尚不明确，对其机制的研究更是甚少。
本课题前期工作发现egcg可能抑制hbv复制，病毒dna复制是其增殖成熟的至关重要过程，研究清楚egcg对hbv复制过程的抑制作用机制，有利于在hbv病毒侵入人体初期就将病毒清除，从而控制hbv在人体内的增殖，以达到有效清除hbv感染的目的，甚至可能为目前大量的hbv携带者和hbv导致的肝病变患者带来福音。
本研究将证实egcg抗hbv复制的现象，并且首次从自噬和信号通路两方面揭示其作用机制，探究egcg对hbv复制的影响是否通过通过调控细胞自噬以及上调pi3k-akt-mtor信号通路来实现。
5. 研究计划与进展
2013年1月：论文选题，相关实验技术的熟悉和学习；2013年2月：查询相关文献资料，设计实验方案，准备实验材料2013年3月至5月：撰写开题报告，根据方案完成实验内容，记录处理实验数据，处理实验结果；2013年5月到6月：撰写毕业论文并准备答辩。
目前课题已按预期开展，预计能够按照计划顺利进行。
