1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
1.1本课题的意义:
离子通道和转运体是细胞膜上的重要蛋白,介导了细胞对离子的吸收和释放,具有非常重要的生理功能,诸如,营养元素的吸收和转运,调节气孔运动,调节细胞渗透势等(schroeder et al., 2013)。而离子通道的分子调节机制也日益成为植物生理学和分子生物学研究领域的热门课题。
1.2国内外研究概况:
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2. 研究的基本内容和问题
2.1研究内容
(1)克隆oshkt1;1全长,构建非洲爪蟾卵母细胞表达载体。
(2)电生理学检测oshkt1;1的通道活性。
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3. 研究的方法与方案
3.1研究方法:
(1)载体构建。pcr克隆oshkt1;1的编码序列,用限制性内切酶分别处理片段和蛙卵表达载体,经dna连接酶连接后,转入大肠杆菌中,鉴定。
(2)电生理学检测。将构建好的蛙卵载体单酶切线性化,体外转录成crna,注射蛙卵后,表达2-3天记录电流。
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4. 研究创新点
离子通道和转运体的活性调节,OsHKT1;1的通道活性调控目前还没有明确的报道,研究脂信号对其的调控不仅可以更加深入了解OsHKT1;1的分子调控机制,而且是对植物细胞脂信号途径生理功能的重要补充。
5. 研究计划与进展
2015年3月:
克隆oshkt1;1的全长编码区序列,并构建蛙卵表达载体,大批量纯化载体质粒dna,体外转录制备crna。
2015年4月至2015年5月:
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