利用土壤宏基因组文库鉴定微生物抗MAs(III)的分子机制开题报告

 2022-01-23 09:01

1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)

本课题的意义、国内外研究概况、应用前景等(列出主要参考文献)砷是一种环境中广泛分布的、有毒的类金属元素。

目前,砷污染已成为一个全球性的环境问题,在全球多个国家与地区包括孟加拉国、印度、越南、澳大利亚、日本、美国及我国等都有关于水体和土壤砷污染的报道[1]。

环境砷污染的危害巨大,例如土壤砷污染会影响作物的生长,进而影响作物的产量及品质安全。

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2. 研究的基本内容和问题

研究的目标、内容和拟解决的关键问题研究的目标: 本课题试图通过分离、鉴定具有mas(v)还原能力的微生物菌株,为构建mas(v)生物检测器提供菌种资源。

研究的内容:1. 分离:采用微生物常规分离技术从3份具有砷甲基化能力的稻田土壤中富集分离出具有mas(v)还原能力的微生物菌株。

2.鉴定:对分离的目的菌株开展16s rrna基因序列鉴定,以明确其分类学地位。

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3. 研究的方法与方案

研究方法、技术路线、实验方案:研究方法:从砷污染的稻田土壤中分离具有还原mas(v)能力的菌株,采用一系列标准的鉴定方法明确菌株的分类学地位,同时对其的还原mas(v)能力以及各种影响其还原能力的因素进行研究。

技术路线: 实验方案:1.富集培养:取适量(2-5 g)鲜土放入含有合适浓度的mas(v)的st10-1液体培养基中,放入30℃、200转的摇床中恒温培养3天。

2.菌株的筛选:检测富集液中是否有mas(iii)的产生,如果有,将富集液稀释成五个合适的梯度涂布于st10-1固体培养基平板上,倒置30℃培养,7天后,挑取形态特征明显有区别的菌落,分别接种于含有适量浓度的mas(v)的st10-1液体培养基中,4天后检测分析培养液中是否有mas(iii)的产生,以此为依据判定挑取的菌株是否有还原mas(v)的能力,最终确认功能菌株,划线纯化两次,用终浓度为20%的甘油保存功能菌株,并放置于-70℃冰箱进行保藏。

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4. 研究创新点

特色或创新之处在未能解析出MAs(V)的还原机制的条件下,为构建MAs(V)细菌全细胞检测器,转换思路,从环境中直接获取具有MAs(V)强还原能力的微生物菌株,并以该菌株为宿主,在其体内架构MAs(III)检测所需的生物元件,以最终实现利用该细菌全细胞检测器有效检测环境中存在的MAs(V)的目的。

5. 研究计划与进展

研究计划及预期进展2016.112017.3菌株的筛选和纯化。

2017.32017.3(中旬) 菌株的分类学鉴定2017.42017.5 菌株的功能研究①菌株对MAs(V)的耐性:②菌株对MAs(V)的的还原能力2017.52017.5(中旬) 撰写毕业论文

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