2016-2018年中国部分地区猪圆环病毒2型的分子流行病学研究开题报告

 2022-02-08 20:08:54

1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)

1、本课题的意义及研究概况

1974 年,德国学者 tischer 等[1]在多株连续传代 pk-15(porcine kidney-15)细胞系(atccccl31)中发现一种圆形小颗粒病毒,该病毒能够持续感染 pk-15 细胞系,但不引发细胞病变,最初被认为是一种细胞污染物。1982 年,tischer 等[2]采用超速离心法分离到该病毒粒子,首次证实这种细胞污染物是一种单股环状、无囊膜、呈正二十面体对称的dna病毒。因其来源于当初制备 pk-15 细胞的猪肾组织,故将其命名为猪圆环病毒(porcinecircovirus,pcv)。1996 年 clark[3]首次报道了一种与pcv相关的新病断奶仔猪多系统衰竭综合征(postweaning multisystemicwasting syndrome,pmws)。

之后经学者研究表明,从pmws病料中分离出的pcv与从pk15细胞系中分离到的pcv不同,因此,研究者们根据这两毒株在致病性、核酸序列的差异和抗原性,将pcv分成两个基因型。从pk15细胞系中分离得到的非致病性猪圆环病毒命名为pcv1,从pmws病死猪病料中分离得到的猪圆环病毒命名为pcv2[4、5]。pcv2对各个年龄段的猪均易感,对大多数品种的猪也易感。发生pcv2单纯感染的猪通常没有显而易见的临床症状,但当pcv2与其他病原(猪链球菌、猪细小病毒、猪伪狂犬病毒、猪瘟病毒、猪蓝耳病毒等)发生混合感染时则表现出很明显的临床症状,且会造成猪的死亡,带来巨大的经济损失。

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2. 研究的基本内容和问题

研究的目标

本课题旨在基于前人相关研究的基础上,对2016-2018年中国中东部地区pcv2分子流行病学进行调查,通过采集2016-2018年间中东部地区样品,对病料中的pcv2进行检测,对选定的高浓度样品进行pcv2全基因组测序并作遗传进化分析,为该病的流行及变异情况提供相关的数据。对pcv2的防控具有指导意义。

实验内容

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3. 研究的方法与方案

研究方法

1、病毒核酸的提取:在洁净的解剖台上按操作要求处理病料,剪碎放入研磨器中研磨成匀浆。反复冻融3次后,离心取适量上清,进行dna的提取。

2、pcv2的检测:用荧光定量pcr法检测提取好的核酸。

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4. 研究创新点

特色或创新之处

猪圆环病毒2型目前普遍感染,世界范围内广泛流行,几乎存在于每个猪场。猪圆环病毒已被学术界广泛关注,但不被养殖行业关注。本项目拟应用现代分子生物学技术,针对PCV2基因保守序列,通过普通PCR和荧光PCR分子生物学诊断技术,同时测定其全序列确定其基因型,了解2016-2018年中国中东部流行趋势,为PCV2诊断、综合防制及研究提供重要的第一手技术材料和科学依据。

5. 研究计划与进展

研究计划

第一阶段(2017.10-2017.11)熟悉实验室操作,进行基层实习;

第二阶段(2017.11-2018.01)实习的同时对2016-2017年的样品进行处理,检测pcv2病毒,基因序列测定及分析;

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