1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
意义 6-甲基腺嘌呤(m6a，n6-methyladenosine)是真核生物中普遍存在的具有甲基化修饰的核苷。
模式植物拟南芥中，m6a甲基转移酶mettl3的同源蛋白为mta，使该基因失活会导致m6a甲基化形成的缺陷及胚胎发育异常，表明了mta在植物发育中的重要作用[1]。
lec1是植物胚发育过程中一个重要的调控因子，能够活化胚胎发生和胚分化过程一些必需基因的表达[2]。
2. 研究的基本内容和问题
研究目标利用胚胎拯救启动子plec1得到植株的目标基因纯合体，进行后续相关基因、甲基转移酶以及m6a修饰有关的研究工作。
研究内容以鉴定过的t-dna插入突变体为实验材料，构建胚胎拯救启动子plec1的载体，侵染转化拟南芥植株，获得目标基因纯合体，观察表型，为后续的相关基因、甲基转移酶以及m6a修饰有关的研究工作打下基础。
拟解决的关键问题获得目标基因纯合体
3. 研究的方法与方案
研究方法采用分子生物学的方法鉴定实验材料是否为突变体，筛选后进行载体的构建，最后采用农杆菌介导的花序侵染法转化拟南芥植株，观察表型并鉴定其是否为目标基因纯合体。
技术路线（见word） 实验方案 1. 拟南芥突变体的筛选与鉴定 1.1 粗提dna 1.1.1 取叶片在1.5ml离心管中，加入250μl提取液（200mm tris-cl(ph 8.0), 250mm nacl, 25mm edta, 0.5% sds）进行研磨，室温放置10min 1.1.2 12000rpm离心5min，取上清 1.1.3 上清转移入新1.5ml离心管中，加入200μl异丙醇，震荡混匀，12000rpm离心5min，弃上清 1.1.4 加700μl 75%乙醇，震荡混匀，12000rpm离心5min，弃上清，晾干沉淀 1.1.5 向离心管中加入50μl ddh2o，放入-20℃冰箱中备用 1.2 pcr鉴定 1.2.1 配置体系成分 10μl体系 ddh2o 3.6 μl 2taq master mix 5.0 μl 引物lp /lb 0.2 μl 引物rp 0.2 μl 模板dna 1.0 μl 1.2.2 pcr扩增循环步骤 温度 时间预变性 94℃ 2min 35个循环 94℃ 55℃ 72℃ 30s 30s 30s 保温 4℃ ∞ 1.2.3 电泳：以dl2000为dna marker，琼脂糖凝胶电泳约35min，在紫外灯下观察电泳分离带的大小。
1.2.4 根据带型选择杂合突变体作为转基因材料 2. 载体构建与转化 2.1 引物的设计与合成 通过拟南芥信息资源网站查询得到基因序列，并利用primer 5软件设计得到基因的pcr引物。
4. 研究创新点
对LEC1及其下游基因进行研究具有重要价值：一方面，通过对相关基因的表达调控研究，人们可以进一步认识体细胞胚的发生机理，从而利用基因工程的方法提高难以再生作物的再生频率；另一方面，可以利用基因工程的方法提高种子蛋白质含量、种子含油量，进行性状上的改良。
5. 研究计划与进展
2017年8月：文献查阅及题目确定 2017年9月：筛选、鉴定拟南芥突变体 2017年10月~2017年1月：构建、转化载体 2018年1月~2018年2月：鉴定转基因植株，获得表型 2018年3月~2018年4月：整理数据，撰写论文
