1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
猪流行性腹泻ped(porcine epidemic diarrhea)，是由猪流行性腹泻病毒引起的一种接触性肠道传染病，其特征为呕吐、腹泻、脱水[1]。临床变化和症状与猪传染性胃肠极为相似。本病只发生于猪，各种年龄的猪都能感染发病。哺乳猪、架子猪或肥育猪的发病率很高，尤以哺乳猪受害最为严重，母猪发病率变动很大。病猪是主要传染源。主要感染途径是消化道[2]。猪流行腹泻病毒 (porcine epidemic diarrhea virus , pedv),属于冠状病毒科冠状病毒属[3]。到目前为止，还没有发现本病毒有不同的血清型[4]。本病毒对乙醚、氯仿敏感。病毒粒子呈现多形性，倾向圆形，外有囊膜。从患病仔猪的肠灌液中浓缩和纯化的病毒不能凝集家兔、小鼠、猪、豚鼠、绵羊、牛、马、雏鸡、和人的红细胞[5]。病毒核酸为单股正链 rna, 整个基因组长度为28033bp 个核苷酸(nt),5'端有一个帽子结构(cap), 3'端有一个 poly (a)尾,编码4个主要的病毒结构蛋白 ,按基因组上的排列顺序依次为 s 蛋白、e 蛋白(sm , small membrane)、m 蛋白(membrane)、n 蛋白(nucleocapsid)。s、e、m和n 基因分别编码纤突蛋白、小膜蛋白、膜糖蛋白、核衣壳蛋白；orf3基因是pedv基因组中唯一的辅助基因，编码 orf3蛋白。
20世纪70年代初英国、荷兰等国家发现一种以猪的腹泻、脱水为主要症状的新型传染病。debouck等在病料中发现一种冠状病毒，并将其命名为cv777株[6]。随后，德国、日本、韩国等多个国家也报道了该病的发生与流行。1982年此腹泻病被正式命名为猪流行性腹泻病（ped），引起此病的冠状病毒命名为猪流行性腹泻[7]。引起此病的冠状病毒命名为猪流行性腹泻病毒。我国于1973年在上海首次发生此病的流行，随后，该病在我国26个省市自治区陆续发生，该病极易感染各年龄段的猪，临床表现为严重水样腹泻，伴有呕吐，脱水严重，粪便为黄绿色或黄灰色；精神沉郁，食欲减退。近年来，该病的流行区域有逐渐扩大的趋势，且该病毒病原常与猪传染性胃肠炎、轮状病毒等其他肠道病原混合感染，给养猪业造成严重经济损失，猪流行性腹泻病已成为我国养猪业重要的腹泻病之一[8]。
自pedv发现以来,各国专家试图用各种方法使病毒适应细胞 ,进行体外培养扩增。1988 年瑞典 hofmann等首次在 vero传代细胞的培养液中加入胰酶,通过在细胞上连续盲传成功获得病毒的细胞培养[9];随后, 日本和韩国也相继报道 pedv在 vero细胞上的培养特性[10]。虽然vero 细胞是目前用于分离培养 pedv 的公认的细胞系 ,但不同来源的 vero细胞、不同毒株和培养条件均是影响病毒分离的重要因素。钱永清等报道, 所用的 vero细胞可耐受 60μg/ml的胰蛋白酶, 且适应vero细胞生长的病毒, 亦可在不加胰酶的条件下在 pk15、ibrs2以及st细胞中生长。hofmann等的实验表明,不加胰酶培养pedv时, 病毒感染细胞的能力会大大减弱,如此连续培养几代后,会引起病毒在细胞上丢失[11]。日本和韩国报道pedv在 vero细胞上传90代以上病变特征仍不明显 , 必须借助于pcr检测方法才能确定病毒是否生长。
2. 研究的基本内容和问题
1.研究目标
本实验拟利用实验室已经分离到的pedv-scms株对该病毒在非洲绿猴传代肾细胞（vero）上进行了传代增殖培养，并对培养特性、培养条件、繁殖滴度进行较为系统的探索，为该病毒生物学特性基础研究和实践中该病毒相关生物制品的发展奠定基础。
2.研究内容
3. 研究的方法与方案
材料与试剂：
pedv-scms毒株、vero细胞由本实验室保存。
1.研究方法
4. 研究创新点
PEDV的体外细胞适应难度大,繁殖条件复杂, 病毒在细胞培养中繁殖滴度低，细胞病变产生不明显,是PEDV体外增殖过程的一个重要技术瓶颈。本实验采用已经分离到的SCMS毒株进行分离传代培养，对该毒株的体外培养条件及传代培养的稳定性作系统研究。
5. 研究计划与进展
1.研究计划
（1）2016.9.5～2016.10.30
对实验涉及的相关理论知识及实验操作方法进行学习；提交毕业论文开题报告；vero细胞培养。
