1. 研究目的与意义
研究背景
稀有糖在自然界中虽然含量少，但在食品、医药等领域发挥重要作用，逐渐成为国内外研究的热点。传统研究稀有糖的生产主要包括生物法和化学法。化学合成法通常有步骤繁琐、光学纯度不够高，且大量使用有机溶剂造成的系列环境问题等缺点，因而探索生物法制备高价值稀有糖越来越受到广大研究人员的重视。目前，微生物及其酶法转化制备稀有糖因反应过程容易、反应条件温和且对环境友好，因而探索生物法以拓宽osrpia的底物谱已成为研究热点。
研究目的
本研究立足于国内外研究现状，以苍白杆菌核糖-5-磷酸异构酶a（osrpia）为原始蛋白酶，对构成osrpia的氨基酸序列基因进行定点突变从而探究osrpia底物谱的改变。
2. 研究内容和预期目标
主要研究内容
1.将甘油管中保存的产osrpia的工程菌菌株的培养。
2.寻找突变位点，设计突变位点引物。
3. 研究的方法与步骤
一．质粒的抽提
1.取过夜菌1.5ml，5000g离心1min收集细菌沉淀，弃上清。再重复一次每管共收集3 ml过夜菌沉淀。
2.每管加入250μl溶液i，重悬细菌沉淀。确保沉淀完全散开，无可见细菌团块。
4. 参考文献
[1] izumori k. bioproduction strategies for rare hexose sugars[j]. naturwissenschaften, 2002, 89(3):120-124.
[2] yeom s j, kim y s, oh d k. development of novel sugar isomerases by optimization of active sites in phosphosugar isomerases for monosaccharides.[j]. appl environ microbiol, 2013, 79(3):982-988.
[3] zhang w, zhang t, jiang b, et al. enzymatic approaches to rare sugar production[j].
5. 计划与进度安排
1）2022-2-20～2022-03-01：查阅资料撰写开题报告；
2）2022-03-01～2022-03-10：寻找突变位点，设计突变位点引物；
3）2022-03-11～2022-04-15：将甘油管中保存的产osrpia的工程菌菌株的培养，对osrpia基因片段的抽提，并进行重叠延伸pcr，突变所需氨基酸序列。
