1. 研究目的与意义
线粒体（mitochondria）是普遍存在于真核细胞中的细胞器，它通过氧化磷酸化进行能量转换，合成能源代谢物质——三磷酸腺苷（atp），为细胞的各项活动提供90%以上的能量，是细胞能量代谢的中心。近年来发现，线粒体还具有其他重要的生物学功能，包括调控细胞凋亡、参与细胞信号转导、生成活性氧等。线粒体dna(mitochondriondna , mtdna)是一条双链(h 链和l 链)超螺旋环状dna .目前mtdna 结构与功能的研究已成为分子进化、疾病诊断、细胞衰老与凋亡、经济性状等领域研究的有力工具
线粒体ＤＮＡ是目前分子生物学研究的一个重要的领域，而鱼类mtdna是鱼类分子系统学研究和群体遗传分析的重要标记。
鲀科（tetraodontidae），是鲀形目下的一个分科，体长通常在200—300毫米，身体短粗偏向亚长椭圆形，头和吻短宽，有16个属约118种，从太平洋到大西洋均有所分布。
2. 研究内容和预期目标
研究内容：
1. 鲀科鱼类线粒体基因组模板准备；
2. 目的序列基因的克隆；
3. 研究的方法与步骤
3.1 暗纹东方鲀线粒体dna 的制备
活体解剖，取肝脏组织用酚-氯仿抽提法提取线粒体dna
3.2 分子量测定
4. 参考文献
[1] 刘丽, 刘楚吾, 张明辉, 等. 不同保存条件下鱼类组织基因组dna的提取效果分析[j]. 广东海洋大学学报, 2007, 27(6):19-22.
[2] 肖武汉, 张亚平. 鱼类线粒体dna 的遗传与进化[j]. 水生生物学报, 2000, 24(4): 228-236.
[3] 郭新红, 刘少军, 刘巧, 等. 鱼类线粒体dna 研究新进展[j]. 遗传学报, 2004 , 31(9) : 983- 1000.
5. 计划与进度安排
（1）2022-2022-1学期17-20周---2022-2022-2学期第1周（2022-3-11），接受任务书。查阅资料，确定所选基因(nd3、nd4l、atp8、atp8)，准备开题报告，外文论文翻译。
（2）第2周~第4周（2022-3-12~4-1）综合相关文献资料，撰写开题报告，原材料制备，完成实验前准备工作，配制各实验所需药品；学习提取鱼的基因组dna和扩增线粒体基因nd3、nd4l。学会使用pcr仪，对pcr反应体系，循环参数进行摸索和调整等措施，学会制胶，学习制备感受态细胞，pcr目的基因。
（3）第5周~第12周（2022-4-2~5-27）完成pcr扩增产物的鉴定与割胶回收，回收纯化产物与载体连接，转化到感受态细胞中，利用白斑筛选阳性克隆，用质粒dna小量试剂盒提取质粒，用双酶切鉴定阳性菌落，阳性菌落质粒dna送到生物公司进行测序。
