1. 研究目的与意义
新型的微生物源杀虫剂多杀菌素是由放线菌刺糖多孢菌经有氧发酵后产生的一种胞内次级代谢产物。因其对农业害虫有着极好的杀虫效果,而对哺乳动物、鱼类、鸟类和大多数益虫具有极高的安全界限,兼具化学农药的高效性与生物农药的安全性,正成为最具有发展前景的新一代杀虫剂。但其产量地下,且发酵周期长达二至三周,是的生产成本极高,严重制约了其生产及实际应用。因此,进行菌种改良,一尽可能地提高多杀菌素产量,成为了开发该种杀虫剂最迫切需要解决的问题之一。
国内对于多杀菌素的研究起步较晚,目前发酵产量仍低于2000 μg/ml,无法满足工业化生产的成本要求。我国是农业生产大国,对杀虫剂的需求量非常大,年销售额达200多亿人民币。多杀菌素作为一种新型的生物农药,不仅用量低,选择性高,而且无残留,不易产生抗药性,具有良好的环境相容性,可以克服化学农药污染环境、破坏生态平衡、易产生耐药性的缺陷。开展本研究符合国内对多杀菌素的技术需求,并且对改善环境污染、保障粮食、食品安全有着重要的现实意义。多杀菌素如能在国内尽早实现产业化,将会拓展我国杀虫药物的市场,在短时间内产生巨大的经济效益和社会效益,对于保障我国粮食安全、确保人民健康、保护生态环境都具有重要意义。
目前,多杀菌素已在许多作物上广泛应用,包括棉花、水果、蔬菜、烟草、中草药等。用其生产的商品也种类繁多,包括用于棉花的tracer,用于林业、蔬菜类作物的success和spin tor,以及用于草皮、观赏植物、家蝇诱饵的conserve。欧盟于2007年已经批准多杀菌素可以在有机物上使用。
2. 研究内容和预期目标
本研究立足于国内外研究现状,以白色放线菌刺糖多孢菌为生产菌,对刺糖多孢菌进行抗性筛选及紫外诱变处理,使菌体在发酵时能最大限度地提高多杀菌素的产量,具体研究内容如下:
1) 制作不同浓度梯度的鼠李糖抗性平板,观察计数平板上的菌落数,确定合适的抗性浓度。
2) 制作不同浓度梯度的链霉素抗性平板,观察计数平板上的菌落数,确定合适的抗性浓度。
3. 研究的方法与步骤
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将自然筛选获得的菌株制成甘油管保存,甘油管接种到平板上进行活化处理,于28℃恒温培养7-10天。
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制作不同浓度的鼠李糖抗性平板,制备菌悬液,稀释8次,取0.1ml涂平板,于28℃恒温培养7-10天,观察并记录菌落生长情况,确定抗性平板浓度。
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制作不同浓度的链霉素抗性平板,制备菌悬液,稀释8次,取0.1ml涂平板,于28℃恒温培养7-10天,观察并记录菌落生长情况,确定抗性平板浓度。
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[1] 李月, 常城, 杨克迁. 多杀菌素生物合成途径及改造策略[j]. 微生物学报, 2011, 51(11):1431-1439.
[2] mertz f p, yao r c. saccharopolyspora spinosa sp. nov. isolated from soil collected in a sugar mill rum still[j]. international journal of systematic bacteriology, 1990, 40(1):34-39.
[3] 柴洪新, 史大昕, 张奇,等. 多杀菌素的研究进展[j]. 化工进展, 2011(s2):239-243.
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1)2022-03-04~2022-03-07:查阅资料撰写开题报告;
2)2022-03-08~2022-03-15:培养基制备与菌种的活化;
3)2022-03-16~2022-04-22:制作不同浓度梯度的鼠李糖抗性平板,观察计数平板上的菌落数,确定合适的抗性浓度;
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