用流式细胞术对淋巴细胞亚群分类的影响条件研究开题报告

1. 研究目的与意义

流式细胞术（Flow Cytometry,FCM）是利用流式细胞仪对生物微小粒子，如细胞、细胞器、生物分子等的物理和生物学特性进行定性定量分析和分选的技术手段，具有操作简单、成本低廉、分析速度快、精准度高等优点。目前，流式细胞术已成为检测细胞中各种生命特征的重要手段，被广泛应用于细胞生物学研究的多个领域。流式细胞术适宜对某一指标作定量检测。然而，流式样本制备过程中多种因素可能对其结果产生干扰。如抗体组合的选择、抗体稀释比例、固定液多聚甲醛的浓度、血样放置时间、保存温度、抗凝剂的选择等。保证试验条件的一致性及可靠性，对受试物免疫毒性作出客观评价，是非常重要的。

2. 研究内容和预期目标

本课题研究采集人外周血血样比较不同浓度多聚甲醛（1%，2%，3%和4%）以及血样放置时间（1d，2d，3d和4d）对外周血淋巴细胞亚群分类结果的影响，以确立多聚甲醛使用浓度和全血放置时间的最优条件，为淋巴细胞亚群分类流式检测条件的优化奠定基础。

3. 研究的方法与步骤

（1）比较不同浓度多聚甲醛对结果的影响

取血样50μl，分别与5μlcd8 -、cd4 -、cd3 -抗体混合，每组平行设置空白对照。混匀样本后于室温、避光条件下孵育30min。在流式管中分别加入1ml的红细胞裂解液并混匀，红细胞充分裂解后，以200×g离心5min，弃上清并加入1mlpbs，之后再次以200×g离心5min弃上清。样本分别经浓度为1%，2%，3%和4%的多聚甲醛溶液固定，制备后于2~8℃保存。连续4d上机测定淋巴细胞荧光强度及cd3 、cd4 、cd8 、百分率及cd4 /cd8 比值。

4. 参考文献

[1]姜华, 文海若, 刘丽, et al. 基于流式细胞术的淋巴细胞亚群分类试验条件比较[j]. 中国医药生物技术, 2019(5):400-405.

[2] 杜秀敏, 郇天笑, 胡成进, et al. 流式细胞术在临床检测中的影响因素探讨[j]. 临床检验杂志, 026(4):245,256.

[3] 胡小梅, 刘高峰, 黄银久, et al. 流式细胞术在细胞生物学研究中的应用[j]. 齐齐哈尔医学院学报(3):98-100.

5. 计划与进度安排

一、查阅文献，写出开题报告（2022年3月15日前完成）

根据论文题目，查阅正式出版的中外学术期刊和专著，从中选择10篇以上参考文献（外文1-2篇或以上），认真阅读，深刻理解，综合分析，掌握其最新动态，参照论文设计任务书的研究内容，写出开题报告。如参考文献要列出作者姓名、论文标题、发表刊物、时间、卷（期）及起止页码。在查阅的文献中选1篇外文（文献内容要结合本研究内容）全文翻译为中文。

二、实验研究前期准备工作（2022年11月11日到2022年3月15日）