盐碱胁迫对大麦幼苗抗氧化酶活性的影响开题报告

1. 研究目的与意义

土壤盐碱化对农林业生产和发展的影响日渐严重，已成为全球范围内随面临的重大环境问题。据不完全统计，世界盐碱地约9.5公顷，相当于全球陆地总面积的7.23%，并且由于人类活动的影响，耕地面积减少，土壤盐碱化的趋势在逐年增加。筛选作物的耐盐碱品种并加以利用是一种行之有效的措施。

大麦具有生育周期短、早熟高产、适应性强等特点，是耐盐碱性较强的作物之一，通过种植耐盐碱作物既能改良土壤，又能有一定的效益，是一种相对耗资少，见效快的盐碱地农业发展方向。

因此，研究盐碱胁迫对大麦幼苗活性的影响，为进一步开展大麦种质的耐盐碱研究和提高大麦耐盐碱生产性能提供理论依据和参考价值。

2. 研究内容和预期目标

盐碱胁迫对植物的伤害可分为离子毒害、渗透胁迫以及高ph胁迫，盐碱胁迫对植物的种子萌发、生长发育以及基因表达都会造成不同程度的影响。

选择大麦期苗作为实验时段，用不同浓度的盐和碱处理，通过特定的实验方法，测量大麦幼苗的逆境指标：超氧化物歧化酶（sod）活性测定、过氧化氢酶（cat）活性测定、过氧化物酶（pod）活性测定。

为此，搞清作物在盐碱环境中生长发育的机理，培育耐盐碱品种成为解决上述问题的关键。 本实验体系采用大麦为实验材料, 探究盐碱胁迫对大麦幼苗抗氧化酶活性的影响,以期为盐胁迫植物的生态防御研究提供参考。

3. 研究的方法与步骤

胁迫处理：以NaCl：Na₂SO₄为1:1配置40mmol/L、60mmol/L、80mmol/L、100mmol/L 4个处理浓度，每组3个重复组，以清水为对照组。

将大麦种子用流动清水冲洗，去漂浮烂的种子，用70%酒精冲洗消毒2min。消毒后，按照5min、2min、2min的时间顺序用蒸馏水冲洗三次。消毒过后，将育苗纸用蒸馏水润湿后平铺在育苗盘中，选取健康饱满的大麦种子，均匀的铺洒在育苗盘中，每盘50粒，每个处理3个重复组。喷洒好适当浓度处理液后，盖上育苗纸。为防止处理液蒸发干涸，在育苗盘顶部包裹一层保鲜膜，留1-2个通气孔后放入25℃恒温培养箱中暗培养3d。3d后，撤掉下层育苗纸，打开保鲜膜，转入25℃恒温培养室培养，采用光暗交替各12h的方式培养至7d后，取出测定各项试验指标。培养期间，每天换育苗盘下层培养液。

（1）SOD活性测定（氮蓝四唑（NBT)光还原法检）

实验步骤：

① 酶液的提取：取大麦叶片剪碎（去掉叶脉），称取0.2g，加2mL提取介质研磨成匀浆，15000rpm离心10min，上清液即为酶提取液。

② 酶活性测定：取干净烧杯按下表添加试剂。将2号置于暗中，1、3号置于光照培养箱中照光10min。照光结束后迅速放入白瓷盘内，盖盖，避免见光。以2号中的反应液调零，测定1、3号反应液在560nm下的OD值。

（2）POD活性测定（愈创木酚比色法）

① 酶液的提取：取大麦叶片剪碎（去掉叶脉），称取0.2~1.0g，加入适量的pH7.8磷酸缓冲液，充分研磨植物粗纤维为止，分装在两个塑料小离心管中，再用pH7.8磷酸缓冲液洗净研钵，洗液一并转入小离心管，10000rpm离心20min，上清液即为酶提取液。

② 酶活性测定：取两支试管，1支为测定管（重复三次），另1只为对照管，按下表加入试剂，配成POD反应体系（随酶量的增减，相应改变加入磷酸缓冲液的量，以保持总体积不变）。摇匀，放置在34℃水浴中保温3min后，加入60μL左右三氯乙酸，摇匀，以对照管作用液为空白，在470nm波长下比色，读取OD值。

（3）CAT活性测定（紫外分光光度法）① 酶液的提取：取大麦叶片剪碎（去掉叶脉），称取0.5g置研钵中，加入2~3mL4℃下预冷的pH7.0磷酸缓冲液和少量石英砂研磨成匀浆后，转入25mL容量瓶中，并用缓冲液冲洗研钵数次，合并冲洗液，并定容到刻度。混合均匀将量瓶置5℃冰箱中静置10min，取上部澄清液在4000rpm下离心15min，上清液即为过氧化氢酶粗提液。5℃下保存备用。

② 酶活性测定：取10ml试管3支，其中1支为对照管，2支为处理管，按下表顺序加入试剂，其中对照管中加入的粗酶液为煮死后的酶液。25℃预热后，逐管加入0.1mol/L H₂O₂0.3mL,每加完一管立即记时，并迅速倒入石英比色杯中，240nm下测定吸光度，每隔1min读数一次，共测4min，待3支试管全部测定完后，计算酶活力。

4. 参考文献

[1]孙建,徐晓芸,马增科,等.大麦发芽期耐盐性种质鉴定及其生理响应特征分析[j].干旱地区农业研究,2019,37(06):16-23.

[2]张田田.盐碱地改良及园林绿化施工技术探究[j].现代园艺,2018(22):193.

[3]李焕勇,杨秀艳,唐晓倩,等.植物响应盐胁迫组学研究进展[j].西北植物学报,2016,36(12):2548－2557．

5. 计划与进度安排

合理安排实验进度：

1.2022-2022-1学期

（1）17-19周：确定选题，查阅相关文献资料；