1. 研究目的与意义
普鲁兰酶（pullulanase）是一类可专一性作用于支链淀粉中α-1,6-糖苷键，水解支链淀粉的淀粉脱支酶。
淀粉是自然界广泛存在的高分子化合物，由直链淀粉与支链淀粉两部分组成，直链淀粉结构无分支，螺旋状，可溶于水且利用率高，支链淀粉不易利用，在分支处为α-1,6-糖苷键。
大部分原料淀粉中支链淀粉占比约80％，普鲁兰酶可将支链淀粉水解为麦芽糖、麦芽三糖等，有效提高糖化率和原料淀粉的利用效率，因而在生产上得到了一定的应用。
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2. 研究内容和预期目标
1. 温泉普鲁兰酶产生菌的筛选
2. 温泉普鲁兰酶产生菌的初步鉴定3. 研究的方法与步骤
1、实验材料
1.1试剂配制
（1）普鲁兰糖溶液(0.5%)：称取普鲁兰糖0.50g，加入80ml蒸馏水水，充分溶解后定容至100ml，即配即用。
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4. 参考文献
[1] bender h, lehmann j, wallenfels k . pullulan, an extracellular g lucan from pullularia pullulans [j]. biochim biophys acta, 1959, (36): 309-316[2] bender h, wallenfels k. untersuchungen and pullulan.Ⅱ, spezifischer abbau durch ein bakterielles [j]. enzym biochem z, 1961, (334):79-95[3] 高涛, 王芳, 别小妹, 等. 产耐热普鲁兰酶菌株的分离、筛选与鉴定[j]. 食品科学, 2017, ( 8) : 117-121.[4] lu z, hu x, shen p, et al. a ph-stable，detergent and chelator resistant type i pullulanase from bacillus pseudofirmus 703 with high catalytic efficiency [j]. int j biol macromol, 2018, 109: 1302-1310.[5] 刘程惠, 胡文忠. 王艳颖. 等. 鲜切生菜致腐霉菌的分离鉴定[j]. 食品工业科技, 2016, 37(3) : 135- 138.[6] 唐宝英. 耐酸耐热普鲁兰酶菌株的筛选及发酵条件的研究[j]. 微生物学通报, 2001, 28(1):39-43.[7] 乔宇. i-型普鲁兰酶产业菌的筛选及其基因、克隆、分子改造和高密度发酵表达研究 [d]. 中国农业科学院, 2012.[8] 陈文波. 普鲁兰酶的产生菌筛选及其表达与分泌调控[d]. 江南大学, 2013.[9] 王剑锋. 新型耐热普鲁兰酶的筛选、分子改良及固定化研究[d]. 江南大学, 2018.[10] 吴永, 王淑军, 吕明生, 等. 一株产普鲁兰酶菌株的筛选鉴定、酶学性质及海带多糖酶解产物的抗氧化活性[j]. 食品工业科技, 2018, 39(17): 106-111.[11] 董桂秀, 杨平平, 夏涛, 等. 普鲁兰酶的研究进展[j]. 安徽农业科学, 2012, 40(18) : 9874-9877.[12] 谢能中, 王青艳, 米慧芝, 等. 产普鲁兰酶克雷伯氏菌的分离鉴定及酶学性质研究[j]. 广西科学, 2013, 20(1): 35-39.[13] ］康怀彬, 肖天天, 李净净, 等. 嗜冷普鲁兰酶产生菌nx－1的筛选及产酶条件优化[j]. 食品科学, 2015, 36(1) : 118-123.[14] 王新. 普鲁兰酶产生菌的选育及产酶特性研究[d]. 福州: 福州大学, 2014[15] punina n v, zotov v s, parkhomenko a l, et al. genetic diversity of bacillus thuringiensis from different geo － ecological regions of ukraine by analyzing the 16s rrna and gyrb genes and by ap－ pcr and saaflp [j]. acta naturae, 2013, 5(1) : 90-91.[16] roy a, messaoud e b, bejar s. isolation and purification of an acidic pullulanase type ii from newly isolated bacillus sp.us149 [ j]. 2003, 33(5): 720-724.[17]singh r s, saini g k, kennedy j f. covalent immobilization and thermodynamic characterization of pullulanase for the hydrolysis of pullulan in batch system [j]. carbohydrate polymers, 2010, 81(2) : 252-259.[18] singh r s, saini g k, kennedy j f. maltotriose syrup preparation from pullulan using pullulanase [j]. carbohydrate polymers, 2010, 80(2) : 401-407.[19] li x, fu j, wang y, et al. preparation of low digestible and viscoelastic tigernut (cyperus esculentus) starch by bacillus acidopullulyticus pullulanase [j]. international journal of biological macromolecules, 2017, (102) : 651-657.
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5. 计划与进度安排
1、2022-2022-1学期17-20周～2022-2022-2学期1-2周（2022-12-28~2022-3-14），接受任务、查阅和翻译文献，撰写开题报告；
2、第3周~第5周（2022-3-15～2022-4-4），完成实验前准备工作，配制各实验所需药品。
3、第6周~第7周（2022-4-5～2022-4-18），预实验
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普鲁兰酶（pullulanase）是一类可专一性作用于支链淀粉中α-1,6-糖苷键，水解支链淀粉的淀粉脱支酶。
淀粉是自然界广泛存在的高分子化合物，由直链淀粉与支链淀粉两部分组成，直链淀粉结构无分支，螺旋状，可溶于水且利用率高，支链淀粉不易利用，在分支处为α-1,6-糖苷键。
大部分原料淀粉中支链淀粉占比约80％，普鲁兰酶可将支链淀粉水解为麦芽糖、麦芽三糖等，有效提高糖化率和原料淀粉的利用效率，因而在生产上得到了一定的应用。
2. 研究内容和预期目标
1. 温泉普鲁兰酶产生菌的筛选
2. 温泉普鲁兰酶产生菌的初步鉴定3. 研究的方法与步骤
1、实验材料
1.1试剂配制
（1）普鲁兰糖溶液(0.5%)：称取普鲁兰糖0.50g，加入80ml蒸馏水水，充分溶解后定容至100ml，即配即用。
4. 参考文献
[1] bender h, lehmann j, wallenfels k . pullulan, an extracellular g lucan from pullularia pullulans [j]. biochim biophys acta, 1959, (36): 309-316[2] bender h, wallenfels k. untersuchungen and pullulan.Ⅱ, spezifischer abbau durch ein bakterielles [j]. enzym biochem z, 1961, (334):79-95[3] 高涛, 王芳, 别小妹, 等. 产耐热普鲁兰酶菌株的分离、筛选与鉴定[j]. 食品科学, 2017, ( 8) : 117-121.[4] lu z, hu x, shen p, et al. a ph-stable，detergent and chelator resistant type i pullulanase from bacillus pseudofirmus 703 with high catalytic efficiency [j]. int j biol macromol, 2018, 109: 1302-1310.[5] 刘程惠, 胡文忠. 王艳颖. 等. 鲜切生菜致腐霉菌的分离鉴定[j]. 食品工业科技, 2016, 37(3) : 135- 138.[6] 唐宝英. 耐酸耐热普鲁兰酶菌株的筛选及发酵条件的研究[j]. 微生物学通报, 2001, 28(1):39-43.[7] 乔宇. i-型普鲁兰酶产业菌的筛选及其基因、克隆、分子改造和高密度发酵表达研究 [d]. 中国农业科学院, 2012.[8] 陈文波. 普鲁兰酶的产生菌筛选及其表达与分泌调控[d]. 江南大学, 2013.[9] 王剑锋. 新型耐热普鲁兰酶的筛选、分子改良及固定化研究[d]. 江南大学, 2018.[10] 吴永, 王淑军, 吕明生, 等. 一株产普鲁兰酶菌株的筛选鉴定、酶学性质及海带多糖酶解产物的抗氧化活性[j]. 食品工业科技, 2018, 39(17): 106-111.[11] 董桂秀, 杨平平, 夏涛, 等. 普鲁兰酶的研究进展[j]. 安徽农业科学, 2012, 40(18) : 9874-9877.[12] 谢能中, 王青艳, 米慧芝, 等. 产普鲁兰酶克雷伯氏菌的分离鉴定及酶学性质研究[j]. 广西科学, 2013, 20(1): 35-39.[13] ］康怀彬, 肖天天, 李净净, 等. 嗜冷普鲁兰酶产生菌nx－1的筛选及产酶条件优化[j]. 食品科学, 2015, 36(1) : 118-123.[14] 王新. 普鲁兰酶产生菌的选育及产酶特性研究[d]. 福州: 福州大学, 2014[15] punina n v, zotov v s, parkhomenko a l, et al. genetic diversity of bacillus thuringiensis from different geo － ecological regions of ukraine by analyzing the 16s rrna and gyrb genes and by ap－ pcr and saaflp [j]. acta naturae, 2013, 5(1) : 90-91.[16] roy a, messaoud e b, bejar s. isolation and purification of an acidic pullulanase type ii from newly isolated bacillus sp.us149 [ j]. 2003, 33(5): 720-724.[17]singh r s, saini g k, kennedy j f. covalent immobilization and thermodynamic characterization of pullulanase for the hydrolysis of pullulan in batch system [j]. carbohydrate polymers, 2010, 81(2) : 252-259.[18] singh r s, saini g k, kennedy j f. maltotriose syrup preparation from pullulan using pullulanase [j]. carbohydrate polymers, 2010, 80(2) : 401-407.[19] li x, fu j, wang y, et al. preparation of low digestible and viscoelastic tigernut (cyperus esculentus) starch by bacillus acidopullulyticus pullulanase [j]. international journal of biological macromolecules, 2017, (102) : 651-657.
5. 计划与进度安排
1、2022-2022-1学期17-20周～2022-2022-2学期1-2周（2022-12-28~2022-3-14），接受任务、查阅和翻译文献，撰写开题报告；
2、第3周~第5周（2022-3-15～2022-4-4），完成实验前准备工作，配制各实验所需药品。
3、第6周~第7周（2022-4-5～2022-4-18），预实验
