螯合镧喷施对酸雨胁迫下玉米生理指标的影响开题报告

研究方法：

培养好植物幼苗后按照各自条件喷施酸雨与镧螯合物，喷施后每隔一定天数测量各个指标，每个指标至少测量3次并对数据进行差样分析。

本课题需测量以下8种指标，测量方法标注在指标后的括号中：脯氨酸含量（茚三酮法）、氧自由基产生速率（羟胺氧化法）、过氧化物酶活性（愈创木酚法）、质膜透性（电导率测定法）、丙二醛含量（TBA显色法）、叶绿素含量（叶绿素仪测定法）、硝酸还原酶活性（磺胺比色法）、过氧化氢酶活性（紫外吸收法）。

步骤：

一、溶液配制

以V（SO42-）：V（NO3-）=4.8：1的比列配制浓度为1.0mol/L的酸雨母液，用滴管取蒸馏水滴加到母液中并稀释至pH为3.0，倒入喷壶中备用。

取螯合镧干粉，用植物培养液溶解，浓度为20mg/L。

二、实验材料培养方法

玉米采用无土培养的方法，光暗比为2：1,光照时20℃，暗处理时14℃。在玉米种子萌发7天后更换霍氏培养液，此后每7天更换一次培养液以满足玉米幼苗的生长需求。

三、实验设计

本实验设置4个实验组，分别为对照组、酸雨组、螯合镧根施组、螯合镧叶喷组。在培养的第17天向最后两组分别施加螯合镧溶液，根施组直接将溶液加入培养液中，叶喷组则将溶液喷洒在玉米幼苗的叶子上。第18天向除对照组外的三组喷施酸雨。第19天进行第一次指标测量，第23天进行第二次指标测量，此后每5天进行一次测量。

四、生理指标测定

（1）脯氨酸含量

测定方法：茚三酮法

步骤：称取定量玉米叶片研磨，加入磺基水杨酸溶液，沸水浴提取后吸收提取液加入冰醋酸和酸性茚三酮试剂，在沸水浴中冷却后加入甲苯，摇晃静置后取上层液离心，吸取上层溶液,以甲苯溶液作为空白对照，测量其在520nm的OD值。代入标准曲线，得到脯氨酸含量。

（2）氧自由基产生速率

测定方法：羟胺氧化法

步骤：称取定量玉米叶片，加入磷酸缓冲液充分研磨后多次离心，取上清液。

在样品 提取液中加入磷酸缓冲液，盐酸羟胺，摇匀。保温后加入对氨基苯磺酸和α萘胺，混合，保温，取出后测530nm测量OD值。

（3）过氧化物酶活性

测定方法：愈创木酚法

步骤：称取定量玉米叶片，利用磷酸缓冲液提取粗酶液，然与添加了愈创木 酚的反应混合液在470nm进行比色，读取0-5min的OD值变化。

（4）质膜透性

测定方法：电导率测定法

步骤：取定量玉米叶片，利用真空干燥器抽气再通气，利用电导率仪测出电导率，通过计算得出质膜透性

（5）丙二醛含量

测定方法：TBA显色法

步骤：取定量水稻叶片，利用TCA提取粗液，离心取上清。加入TBA混合沸水浴，在450nm和532nm处测量OD值。

（6）叶绿素含量

测定方法：叶绿素仪测定法

步骤：由SPAD502叶绿素含量测定仪测量，取30个平行样。

（7）硝酸还原酶活性

测定方法：磺胺比色法

步骤：称取定量玉米叶片，加入蒸馏水、磷酸缓冲液、硝酸钾，抽真空后避光保存，称取溶液加磺胺溶液、α-萘胺溶液，静置后在520nm测OD值。

（8）过氧化氢酶活性

测定方法：紫外吸收法

步骤：称取定量玉米叶片，研磨成匀浆后用缓冲液冲洗并定容，混匀静置取上清液离心后保存上清，预热后加入H2O2后计时并在240nm处测定吸光度，计算酶活力。

五、数据处理

每次测量指标需做3次或以上平行实验，取其中差距最小的三组计算均值、标准差、相对值，用SPSS做组间的显著性差异。