1. 研究目的与意义
植物在长期进化的过程中,为了抵御各种的胁迫有其自身的一整套的复杂机制。其中基因转录表达调节机制是尤为重要的一个部分。拟南芥基因组中至少含有1500多个基因表达转录因子,可见转录因子在生物生长发育的重要性。目前,已经分离出大量与应答各种胁迫和抗逆反应相关的转录因子。bhlh即为其中研究较多较为重要的一个。
2. 研究内容和预期目标
研究内容:
1、采用同源克隆法从苏州碧螺春叶片cdna 中克隆转录因子cs bhlh2
3. 研究的方法与步骤
1、苏州碧螺春rna的提取:采集苏州碧螺春新鲜叶片,在液氮中研磨,用rna提取试剂盒提取总rna。
2、cdna的合成:以上述总rna为模板,用反转录试剂盒合成cdna。
3、以上述cdna 为模板,采用巢式pcr 进行扩增,两轮 pcr 程序均为:95℃预变性 3 min,然后 95℃变性 30 s,55℃退火 30 s,72℃延伸 2 min,30 个循环,最后 72℃延伸10 min。将第一轮 pcr 产物稀释 10 倍后取 1μl 做模板进行第二轮 pcr。
4. 参考文献
[1]carretero-paulet l, galstyan a, roig-villanova i, et al.genome-wide classification and evolutionary analysis ofthe bhlh family of transcription factors in arabidopsis, poplar, rice, moss,and algae [j]. plant physiol, 2010, 153:1398-1412.
[2] gabrielatoledo-ortiz, enamul huq, peter h quail. the arabidopsis basic helix-loop-helixtranscription factor family [j]. plant cell, 2003, 15(8): 1749-l770.
[3] sushengsong, tiancong qi, meng fan, et al. the bhlh subgroup iiid factors negativelyregulate jasmonate-mediated plant defense and development [j]. plos genetics,2013, 9(7): 523-528.
5. 计划与进度安排
1、2022年3月11日~2022年3月25日,接受任务、查阅和翻译文献,撰写开题报告;
2、2022年3月28日-2022年4月8日,完成实验前准备工作,配制各实验所需药品。
3、2022年3月22日~2022年4月4日,采集植物材料,提取苏州碧螺春rna和cdna。
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