剪切型hSUMO蛋白的重组质粒构建与表达开题报告

 2022-05-20 10:05

1. 研究目的与意义

背景目的及意义:

随着人类基因组计划的完结,蛋白质结构与功能的关系成为当前生物学研究 的热点。其中,蛋白质的翻译后修饰受到科研人员的广泛关注(如甲基化,磷酸 化,泛素化和类泛素化等)。这些翻译后修饰蛋白在生物体内发挥着重要的生理功能。sumo蛋白是一种类泛素蛋白,它可以通过el,e2,e3三级酶联反应共价 偶联到某些底物蛋白上,形成sumo修饰的目标蛋白,而sumo化蛋白在生物 体内的核质转运、信号传导、dna的损伤修复和蛋白质的降解等过程中发挥着 重要的作用。在sumo化的过程中,sumo蛋白本身也可以被乙酰化或者多聚化,sumo蛋白本身的这种修饰对sumo化蛋白的功能发挥同样具有重要的作用。

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2. 研究内容和预期目标

本课题主要研究内容有:

1、sumo基因的确定

2、对于sumo基因进行合成,鉴定及回收

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3. 研究的方法与步骤

1、供体菌培养( lb培养基)和质粒的提取(按照试剂盒步骤操作)

2、琼脂糖凝胶电泳检出质粒

3、目的基因的获取:通过pc合成r获得目的基因,经过高温变性,低温退火,中温延伸3个步骤

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4. 参考文献

1.吴乃虎.“琼脂糖凝胶电泳。”遗传工程1(1983):0.8.

2.张岚岚,徐春燕,and 徐昌杰。“大肠杆菌感受态细胞转化能力的影响因素。”细胞生物学杂志26.4(2004):429-432.

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5. 计划与进度安排

(1)2022-2022-1学期17-20周~2022-2022-2学期第1周~第2周(2022-12-25~2022-3-16),查阅资料,目的基因序列的确定,准备开题报告,外文论文翻译; (2)第3周~第6周(2022-3-19~4-13),设计引物、选择合适酶切位点、质粒抽提、细胞培养等实验、初步设计;(3)第7周~第11周(2022-4-16~5-18),目标基因扩增、剪切、载体连接、转化、细胞培养、转化子的检测以及重组子的细胞表达等(4)第12周~第14周(2022-5-21~6-8),整理、撰写论文,完成;一张基因扩增电泳检测图、一张质粒酶切电泳检测图,一张重组子构建检测图以及一张蛋白表达电泳图(5)第15周~第16周(2022-6-11~6-19),提交重组子构建的重组细胞、实验报告、英文翻译、图表等,毕业答辩。

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