不同预处理方法对鹅掌楸根尖染色体形态的影响开题报告

 2021-08-08 11:04:49

1. 研究目的与意义

获得染色体分散良好的制片,是进行染色体核型分析、带型分析以及荧光原位杂交以及进一步利用FISH技术构建物种的物理图谱等染色体细微结构研究的基础。所以,可以说预处理是否适宜,是染色体制片技术中最关键的操作步骤。如果预处理的效果优良,则即便是初学者也不难制作出优良的制片,反之,如果预处理失败,则即便是经验丰富者也很难制作出优良的制片。因此,有经验的人非常重视这一操作步骤,因为它在染色体制片的各个环节中居最重要的地位。

2. 国内外研究现状分析

由于鹅掌楸在植物分类地位的特殊位置,不仅是研究系统进化、遗传多样性和杂交育种的好材料,也是探讨物种地理分布、居群与群落生态等的重要研究对象。近20年来,国内外众多研究者对鹅掌楸进行了大量的研究工作,为鹅掌楸的保护提供了理论依据和实践基础。

3. 研究的基本内容与计划

在植物体细胞染色体的观察和研究中,无论是进行染色体计数,还是核型分析以及分带,一般均以有丝分裂中期的染色体最为合适。因为此时期的染色体高度浓缩,形态和结构也比较清晰。但是,在有丝分裂周期中,分裂中期的持续时间很短。一般只有10-30min。因此,在正常条件下,中期分裂相所占比例很小。此外,分裂中期的染色体紧密排列在细胞的赤道面上,又有纺锤丝的牵连,所以,在制片时,是很难将其分散开的。尤其是染色体较大或数量比较多的材料,很容易产生染色体的严重重叠,不仅不能识别单个的染色体形态,有时甚至连计数也困难。

为了克服上述困难,体细胞染色体制片,一般需要用化学的或物理的方法对材料进行预先处理。这些方法的作用机理在于阻止或破坏纺锤体微管的形成。由于不能形成纺锤体,因此,有丝分裂过程被阻抑在分裂中期阶段,这样便可以累积比较多的处于分裂中期的染色体。预处理的另一作用是可以导致染色体高度浓缩,使染色体变短,从而利于染色体的分散。

4. 研究创新点

有研究表明, 在预处理前对材料进行蒸馏水活化有助于提高试验效果,目的是造成细胞内外压力差,增加细胞吸收药液的能力。该试验比较发现,制片效果关键还在于预处理试剂浓度和处理时间,与预处理所使用试剂无明显关系。在预处理过程中常出现的问题有:(1)出现染色体拖尾,带小蝌蚪及边缘不整齐现象,说明处理时间不够,染色体聚缩程度不到位,这样的染色体很难进行分析。(2)如试验中出现染色体呈豆状,且易粘连在一起,原因是预处理时间长,染色体聚缩严重,失去它应有的形态,染色体亦极难计数。(3)如预处理时间过长,染色体( 染色质)过度聚缩在一起,会出现许多小黑团。(4)试验过程中饱和对-二氯苯溶液和0.002mol/L的8-羟基喹啉,处理材料一般为2 h左右。使用0.05%秋水仙素混合液预处理时,只需20-30m in,染色体不仅聚缩度适中,且分散效果良好。在秋水仙素液中加入的二甲基亚砜(DMSO )能增加细胞的透性,促进材料对秋水仙素的吸收,缩短了处理时间,也提高了中期细胞的获得率。同样,在饱和对-二氯苯溶液和0.002mol/L8-羟基喹啉中,按体积比100:1加入二甲基亚砜,也可使预处理时间从2h缩短至30min。

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