鸟苷酸激酶AtGK1真核表达载体构建开题报告

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1. 研究目的与意义

实验首先是构建含拟南芥鸟苷酸激酶的cDNA序列的真核表达载体，然后转化到酵母菌株中，利用IPTG来诱导蛋白表达，通过PAGE分析表达的情况，再借助表达载体上的标签纯化表达蛋白，最后再以GMP和ATP为底物，对已经纯化的鸟苷酸激酶进行酶活测定。通过对拟南芥鸟苷酸激酶真核表达、纯化和酶活测定结果的研究，可以进一步增加对鸟苷酸激酶的认知和了解，同时为下一步研究拟南芥鸟苷酸激酶在真核细胞中的作用机制奠定基础。

2. 国内外研究现状分析

1.观察adp核糖化因子鸟苷酸激酶1(asapl)对胃癌细胞株sgc7901增殖、迁移能力的影响，研究证实asapl的过表达可以提高胃癌细胞的生长活性，并可以加强其迁移能力。研究表明asapl介导的肿瘤侵袭还可能与多条信号通路有关。高表达的asapl可以提高与肿瘤发生发展密切相关的内皮生长因子受体(egfr)的循环反馈。

2.研究发现环鸟苷酸蛋白激酶在促进鼠小脑颗粒细胞的生存和抵抗酒精的神经毒性过程中发挥重要的作用。

3.研究发现鸟苷酸蛋白激酶（pkg）是no和利钠肽舒张血管、抗血栓形成和其它心血管保护效应的重要介导物质，多种心血管系统常见疾病如糖尿病血管病变、高血压和再狭窄等，其病理机制均与pkg的功能异常有关。

3. 研究的基本内容与计划

1.前期（2016/2/22-2016/3/1)，搜集实验的数据和材料，熟悉实验室的环境，学习掌握实验仪器的使用方法。

2.中期（2016/3/1-2016/5/1），按实验设计分步进行实验探究

第一步：提取野生型拟南芥花器官的rna，反转录形成cdna，利用基因特异引物扩增鸟苷酸激酶的cdna序列，进行ta克隆和测序。

4. 研究创新点

1.通过真核表达载体使拟南芥鸟苷酸激酶在酵母菌株中表达。

2.研究拟南芥鸟苷酸激酶如何在酵母菌株中表达以及在酵母菌株中对已经纯化的拟南芥鸟苷酸激酶进行酶活测定。