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1. 研究目的与意义（文献综述）
在植物基因组中，扮演重要角色的转录因子介导了环境因素引起的基因表达。其中，wrky转录因子家族是近年来研究较为广泛的、植物所特有的转录因子，因该家族成员蛋白序列的n端具有高度保守的wrkygqk核心序列而得名。
wrky是植物当中一类重要的转录因子家族[1]。自从甘薯（ipomoea batatas lam）中的第一个wrky转录因子编码基因 spf1克隆后[2]，越来越多的植物基因组中克隆到wrky基因。wrky转录因子具有多种生理作用，在植物生长发育、繁殖、衰老、抗逆性以及次级代谢方面具有重要调控功能。
wrky转录因子具有高度保守的七肽wrkygqk序列(少数为wrkygkk、wkkygqk、wrkygqr、wrkygek)，称为wrky 结构域。另外，wrky转录因子还包含锌指结构域，可分为c2h2和c2hc两种类型。在模式植物拟南芥中，根据wrky 结构域的数量和锌指结构的类型，wrky 转录因子家族成员被分为三大类。第i 类成员具有两个wrky结构域，分别位于n端和c端；另外两类均只含一个在c端的wrky 结构域。第i 类和第ii 类成员的锌指结构均为c2h2型，仅第iii类为特殊的c2hc型。另外，依据保守的wrky 结构域外氨基酸序列的不同，第ii 类wrky 转录因子又可分为5个亚组:ii-a、ii-b、ii-c、ii-d 和ii-e[3]。
2. 研究的基本内容与方案
(1)利用生物信息学方法对nnwrky40进行理化性质、结构及进化分析。
将得到的nnwrky40基因cds序列与已知“中国古代”莲基因组序列进行比对，获得nnwrky40基因的全长dna序列[10]。利用expasy 软件获得nnwrky40蛋白的序列长度、分子量及等电点等相关信息。通过在线工具gsds确定nnwrky40基因的外显子和内含子数目[11]。同时，利用meme 在线软件分析nnwrky40蛋白所有保守基序[12]。
选取拟南芥中74个wrky基因与莲中wrky40进行多序列比对，利用mega 7.0 软件构建系统进化树[13]。
3. 研究计划与安排
第1-2周：查阅文献资料，拟定实验计划，完成开题报告。
第3-4周：分析 nnwrky40的理化性质、结构及进化
第5-6周：半定量pcr，比较不同组织者nnwrky40基因的表达情况
4. 参考文献（12篇以上）
[1] eulgem t, rushton pj, robatzek s, et al. the wrky superfamily of planttranscription factors. trends plant sci, 2000, 5(5), 199-206
[2] ishiguro s, nakamura k. characterization of a cdna encoding a noveldna-binding protein, spf1, that recognizes sp8 sequences in the 50 upstreamregions of genes coding for sporamin and beta-amylase from sweet potato.molecular and general genetics, 1994, 244,563–571.
[3] 文锋，吴小祝，廖亮，刘新圣,李鹏. wrky转录因子在植物抗逆生理中的研究进展[j]. 广西植物. 2017, 37(1), 69-79.
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