水稻血红素加氧酶启动子的克隆及GUS报告基因载体和酵母单杂交载体的构建开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

本课题的研究意义在于随着基因工程的发展,常常需要构建一种能高 水平表达异源蛋白质的表达载体。

启动子对外源 基因的表达水平影响很大,是基因工程表达载体的 重要元件。

因此研究启动子的克隆方法,对研究基 因表达调控和构建表达载体至关重要。

2. 研究的基本内容和问题

研究目标：对水稻的启动子进行克隆，GUS报告基因载体的构建和构建酵母单杂交载体 关键问题：如何将需要的片段插入到感受态细胞中进行转化出来，将质粒转入农杆菌

3. 研究的方法与方案

提取目标水稻DNA，用PCR技术克隆启动子，对条带在2000bp的目标进行切胶回收，在进行连接、转化，挑取能转化进去的进行验证，看是否有2000bp的条带，有的则扩大摇菌送去测序验证对比；后进行质粒的提取，并进行质粒的双酶切，在进行外源片段与载体片段的连接，再进行大肠杆菌转化和重组质粒的鉴定，重组质粒转入农杆菌。

4. 研究创新点

本实验在原有的连接方法T4连接转为Solution I 连接，转化效果更好；而且在传统的过夜连接可变化为25℃PCR仪2h

5. 研究计划与进展

本实验预计在2015年4月份完全结束，具体安排由2014年10月至11月份完成启动子的测序，在11月至12月完成GUS报告基因载体，在2015年3月至4月完成酵母单杂交载体的构建。