利用原核表达系统表达半胱氨酸蛋白酶抑制剂开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

一.本课题意义

中众所周知，茶叶拥有非常突出的保健功能，近些年对茶叶内含物的研究有很多，但大多数都是关注酚、多糖之类的物质，对茶叶中所含的半胱氨酸蛋白酶抑制剂的独特作用我们所知甚少。而大多数人研究的是动物体内半胱氨酸蛋白酶抑制剂在疾病治疗方面的作用，对于植物类特别是茶树半胱氨酸蛋白酶抑制剂研究甚少。本课题所要做的就是利用从茶叶嫩芽中提取的总rna^[1]，在原核生物大肠杆菌内将半胱氨酸蛋白酶抑制剂成功表达并分离提纯^[2]，便于为后来的功能研究提供助力。

蛋白酶抑制剂：根据其活性位点的特异残基，蛋白酶被分为四类：丝氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、金属蛋白酶和半胱氨酸蛋白酶，而蛋白酶抑制剂则分为两大类：特异型与非特异型蛋白酶抑制剂^[3]。蛋白酶抑制剂在植物中广泛存在，很多都起着防御害虫的作用^[4]，除此之外我们对茶树半胱氨酸蛋白酶抑制剂的功能知之甚少，但人们发现动物体内的半胱氨酸蛋白酶抑制剂对诸如肿瘤等疾病有着治疗效果。

2. 研究的基本内容和问题

一.研究目标：茶树叶半胱氨酸蛋白酶抑制剂的原核表达及分离纯化

二. 研究内容：茶树叶总rna的提取、目的基因对应cdna的获得、cdna文库的构建、表达载体的构建、对宿主菌的转化及诱导表达

三. 拟解决的关键问题：

3. 研究的方法与方案

实验方案

一.茶树叶cdna文库的构建及筛选

1.材料与方法

4. 研究创新点

目前国内外主要研究的是动物体内提取的半胱氨酸蛋白酶抑制剂或是某些植物体中的半胱氨酸蛋白酶抑制剂，没有涉及过茶树半胱氨酸蛋白酶抑制剂，而且茶叶因其本身特有的强大的保健功能，让我们可以猜想其是否有某些与众不同之处。

5. 研究计划与进展

一.研究计划：按照实验方案进行。

二. 预期进展：预计两到三个星期基本完成表达，但因茶叶内含物的特殊性，故实验过程中许多内容需要摸索进行，时间可能会延长。