1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
禽流感(avian influenza, ai)在历史上又被成为鸡瘟,是由a型流感病毒引起的禽类的一种从呼吸系统到全身严重性败血症等多种症状的综合病征[1]。
ai不仅在禽类、猪等动物间发生传染，其中h5n1、h7n7、h9n2等亚型禽流感病毒会发生感染人的现象。
ai作为危害世界养禽业的重要传染病之一，其病毒突变几率高，对疫苗研发是一种阻碍，因此更深入的了解流感病毒宿主限制的生物学和遗传学基础，是确定一种新的流感病毒能否在人类之间暴发流行的关键。
2. 研究的基本内容和问题
研究目标本课题通过提取h9n2和h5n1这二类具有不同致病力的毒株的ha片段及ha1片段，通过构建载体在小鼠树突状细胞中进行表达，观察对mirna的影响，并进行比较。
如果对mirna有较为明显的影响，则说明ha是对免疫系统有着重要作用的一个禽流感病毒片段。
如果h9n2和h5n1在树突状细胞中表达差异明显，且对mirna的影响存在显著性差异，则说明不同致病力毒株对相应的ha片段有一定表达差异，同时这也可以为我国禽流感的防治提供一定程度上的理论依据。
3. 研究的方法与方案
研究方法及技术路线目的基因载体的构建小鼠骨髓树突状细胞体外诱导培养转染小鼠骨髓树突状细胞观察并检测对树突状细胞的影响实验方案1.引物设计2.载体构建（1）使用设计好的引物进行pcr扩增，对扩增产物进行胶回收并验证pcr扩增体系：2taq mix 20 μl引物11 μl引物21 μl模板 2 μlddh2o16 μltotal40 μlpcr反应步骤：94℃94℃ 5 min30 s45℃ 30 s72℃ 1 min94℃ 30 s55℃ 30 s72℃ 1 min72℃ 1 min（2）回收步骤：使用上海杰瑞公司的dna回收试剂盒进行胶回收，将回收的dna片段进行跑胶验证，验证是否为目的基因片段。
①加入400μl binding solution ，于50℃-55℃水浴5-7 min直至胶体全部溶解，中间每隔2-3min进行翻转，促进胶体的溶解②将700μl制备管放于准备干净的2ml收集管③将溶解彻底的溶液转移至700μl的制备管中，盖好盖子，放到离心机6000g1min，离心后液体转移到2ml的收集管中，弃掉滤液④向制备管中加入500μl wa溶液，离心10000g1min，弃掉滤液⑤向制备管中加入500μl wash solution，离心10000g1min，弃掉滤液⑥同步骤⑤⑦弃去滤液，将制备管放回收集管中，在空管情况下离心13000g2min。
⑧弃去滤液，将制备管换至一个新的干净的1.5ml的离心管中， 15-30μl的ddh2o洗脱，37℃放置5min之后离心13000g1min。
4. 研究创新点
在之前的实验中已经有人研究过H5N1亚型禽流感病毒血凝素片段免疫效力的研究，以及H7N9亚型禽流感病毒对小鼠骨髓树突状细胞的影响，本实验是进一步深入探究，是流感病毒的HA片段对树突状细胞miRNA的影响，以及具体是怎样的影响
5. 研究计划与进展
研究计划及预期进展10月到3月构建表达载体，并且在3月进行细胞培养。
5月中上旬病毒和质粒导入受体细胞，测定其具体形态学变化定性定量进行分析其化学性质的变化 5月中下旬：实验收尾总觉并进行论文的撰写
