1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
1. 课题意义
百菌清(四氯间苯二腈)是一种高效、低毒、非内吸性的广谱氯代苯腈类杀菌剂,是世界上使用最为广泛的杀真菌剂之一。百菌清在自然环境中较稳定、残效期长,且具有明显蓄积毒性,已被美国环境保护署列为人类潜在致癌物质[1]。在我国,百菌清年产超8000t,主要用于蔬菜、水果、小麦、水稻、花生等农产品的病害防治。百菌清虽没有内吸传导作用,但在植物体表有良好粘着性,且极易进入水体[2]。百菌清的广泛使用,使得土壤、水体、大棚气体、农产品中均能检测到百菌清残留[3],造成严重的农产品污染和环境污染。百菌清的污染修复成为越来越多科研工作者的研究方向。
百菌清的降解方法有光化学、臭氧、微生物降解等,其中用微生物的酶液来降解农药残留具有更多的优点:酶促反应速度快、专一性高、酶与底物作用不需要摄入机制、安全可靠及无二次污染等,因此研究降解百菌清污染的生物途径显得非常重要。土壤中存在大量百菌清降解菌株,其对于百菌清污染修复具有重要价值。
2. 研究的基本内容和问题
3.本项目的研究问题、意义及研究内容
3.1研究问题、意义
百菌清作为世界上应用最广泛的杀真菌剂之一,其在环境中的残留问题不容忽视。枯草芽孢杆菌作为模式菌株广泛应用于工业发酵生产,其优点显著,尤其是可将目的基因表达出的产物分泌到胞外。本项目主要研究:对已构建的可产百菌清水解脱氯酶的枯草芽孢杆菌重组菌株wbapc3进行分子生物学层面的改造,并探讨其在不同发酵条件:接种量、ph、温度及不同培养基组分下的发酵情况,对其进行发酵水平上的优化,可为其广泛应用于工业生产、解决环境中百菌清的残留问题提供理论支持。
3. 研究的方法与方案
4. 实验方法
4.1构建wbapc3点突变菌株。
4.1.1 wbapc3单一点突变菌株的构建
4. 研究创新点
7. 特色及创新
对WBAPC3菌株进行分子生物学层面的优化,并探究不同发酵条件下WBAPC3菌株的发酵情况及不同培养基组分下WBAPC3菌株的发酵情况,最终实现对WBAPC3菌株产Chd的优化。为大规模工业生产Chd酶,进一步降解环境中百菌清残留提供理论支持。
5. 研究计划与进展
8. 研究计划
9. 预期进展
