1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
研究猪气喘病疫苗的最终目的是以最少的免疫接种次数，诱导抗多种疾病的持久免疫。第一，就猪支原体肺炎灭活疫苗而言，选择高效而低毒的免疫增效佐剂来激发机体的细胞免疫并尽可能的减少免疫应激，其次是改善现有的生产工艺以得到高纯度和高滴度的抗原；第二，在现有基础上继续开发弱毒疫苗。采取早期免疫方式以保证弱毒疫苗的有效活力，并且在使用疫苗的同时选择肺炎支原体非敏感抗生素，以控制猪场的其他疾病。
猪支原体肺炎（mycoplasmal pneumonia of swine，mps）是由猪肺炎支原体引起的一种慢性、接触性、呼吸道传染病，又称猪地方流行性肺炎，我国俗称猪气喘病，主要临诊症状是咳嗽和气喘。常有其他病菌继发感染。据我国部分省市规模化养猪场血清学检验，阳性率30％～50％。本病广泛分布于世界各地，在我国许多地区的猪场都有发生。由于带菌病猪的存在和分布面较广，除直接发生死亡外，病猪生长发育缓慢，生长率降低15％左右，饲料利用率降低20％，造成饲料和人力的浪费。有的成为僵猪或继发感染死亡。所造成的经济损失很大，是危害养猪业发展的重要疫病之一。本病只能使猪患病，其他种家畜、动物和人都不感染。不同年龄、性别、品种和用途的猪都能感染发病。哺乳仔猪和断乳仔猪，易感性高，患病后症状明显，死亡率高。怀孕母猪和哺乳母猪次之，肥猪发病较少。我国地方土种猪较杂种猪和纯种猪发病多。
猪肺炎支原体常通过病猪与健康猪接触或通过飞沫经空气传播，广泛流行于世界各养猪国家和地区，是一种顽固性慢性传染病，药物治疗效果不够理想，停药后容易复发，并且该病一旦在猪场流行，就很难根除。因此，预防、控制和净化猪气喘病须采取早期诊断、及时隔离、抗生素治疗或淘汰病猪、疫苗预防、全进全出、严格消毒等综合性措施，其中疫苗预防起着关键性作用。当前兽医临床应用的猪肺炎支原体疫苗以灭活苗为主，也有少数弱毒苗和基因工程苗。
[1] 陈溥言. 兽医传染病学[m]．北京:中国农业出版社,2014
2. 研究的基本内容和问题
使用江苏省农科院兽医所自制的猪肺炎支原体168株F327（批号20150807）、猪肺炎支原体168株F352（批号20120426），免疫10-15日龄猪肺炎支原体阴性健康仔猪（猪肺炎支原体sIgA抗体阴性），通过攻毒测试肺内免疫后的免疫保护效力，比较并确定猪肺炎支原体168株F320s与F350s的安全性、免疫原性。
由于引起猪支原体肺炎的病原不断地变异，产生新的毒株和致病力，因此，疫苗研究的关键之处在于以最新流行的病原毒株为基准，研究出最新的、最有针对性的疫苗代次和剂量，以防治该病。
3. 研究的方法与方案
研究方法：
1.动物分组
将动物分为4组，分别记为G1，G2，G3，G4
2.动物分组及免疫
G1猪肺炎支原体168株F327接种组：4头
G2猪肺炎支原体168株F352接种组：4头
G3健康对照组:3头
G4 攻毒对照组:4头
3.动物日常饲养
正常饲养，如有异常情况立即通知试验负责人，并做好记录。填写 日常饲养观察记录表。记录所有试验猪的如下症状：咳嗽、呼吸困难、俯卧、呕吐、食欲不振、震颤、死亡等。
对死亡猪进行剖检，观察肺部变化、注射部位情况和其他病理变化，填写死亡猪剖检记录表。
如有特殊情况，比如转群，疾病，用药，换料等影响动物的事件。填写 特殊情况记录表。
4.攻毒
采用强毒为20120727批。
冻干攻毒用强毒保存在-20℃。
攻毒剂量按每瓶1000头份量接种，每头猪气管途径接种1头份，5ml。
5.攻毒后观察
攻毒后的28天内应逐日对试验猪进行观察。填写攻毒后临床症状观察记录表
攻毒后出现死亡猪，作剖检并拍照记录。填写死亡猪剖检记录表。
如有特殊情况，比如转群，疾病，用药，换料等影响动物的事件。填写 特殊情况记录
6.攻毒后剖检
所有仔猪在也就是在攻毒后的第28天进行宰杀。
取肺脏按28点法计算病变评分,并计算保护率，采血测定IgG。
7.动物采样及检测
（1）血清IgG抗体检测
于免疫后28天，42天，以及攻毒后28天剖检时，每头猪采血1ml，分离血清。利用IDEXX试剂盒检测。
（2）鼻拭子样品中 SIgA抗体检测
于免疫当天，免疫后4、7、14、21、28、35、42天，以及攻毒后7、14、21、28天采集鼻拭子样品，用sIgA-ELISA试剂盒测定sIgA。
（3）体温检测
于免疫当天，免疫后1、2、3、7天用红外测温仪检测体温（固定位置）。
本实验是鉴定猪肺炎支原体168株不同代次的免疫原性，其中试验方法本实验组已经在其他鉴定免疫原性的试验中得到改善，并且指导老师有丰富的实验经验，导师实验室已经预研究过。
4. 研究创新点
由于引起猪支原体肺炎的病原不断地变异，产生新的毒株和致病力，因此，疫苗研究的创新之处在于以最新流行的病原毒株为基准，研究出最新的、最有针对性的疫苗代次和剂量，以防治该病。
5. 研究计划与进展
第一阶段（2015.9.15-2015.9.22）：选取8日龄仔猪16头人工哺乳，饲养观察到15日龄
第二阶段（2015.9.23-2015.11.3）：随机均分为4组，分别为猪肺炎支原体168株f327接种组、猪肺炎支原体168株f352接种组、健康对照组（不攻毒不免疫）和攻毒对照组（攻毒不免疫），于免疫当天，免疫后4、7、14、21、28、35、42天，各组采鼻拭子，测siga；于免疫后28天，42天，各组采血，测igg；于免疫当天，免疫后1、2、3、7天检测体温。
第三阶段（2015.11.4-2015.12.2）：试验至42天攻毒，观察各组生长状况及有无死亡，计算保护率。于攻毒后28天采血，测igg；攻毒后7、14、21、28天采集鼻拭子测siga。攻毒后28天剖检，检查肺病变，计算肺病变指数。
