1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
cullin蛋白是cullin-ring e3类泛素连接酶(crls家族)的组成部分,可通过参与多种蛋白的泛素化修饰来调节蛋白活性,在多种生物学过程中发挥重要作用。
蛋白质泛素化修饰需要由三个酶(泛素激活酶、泛素转移酶和泛素连接酶)依次催化完成,其中泛素连接酶最为关键,它负责了底物的特异性识别和泛素化连接,其多样性保证了特定靶蛋白的功能调节[1]。
高等真核生物体内存在1000多种e3泛素连接酶,其中cullin-ring类e3连接酶占主体地位[2]。
2. 研究的基本内容和问题
本试验以小鼠为实验动物,目的在于:1.探索Cul9在小鼠卵母细胞中的定位;2.探索Cul9在小鼠卵母细胞减数分裂中细胞周期的调控;3.探索Cul9在小鼠卵母减数分裂中对纺锤体组装和染色体分离的影响。
3. 研究的方法与方案
1.小鼠gv期和gvbd期卵母细胞的获得 将小鼠颈椎脱臼处死,无菌条件下迅速取出双侧卵巢,将卵巢剁成泥浆,然后立即加m2培养液将卵巢泥和培养液混匀在体式显微镜。
用口吸管挑取形态较圆、透明带完整、卵质色泽均一、gv囊泡完整的gv期卵母细胞,取出的gv期卵母细胞在m2培养液中洗3遍,然后再放到m16中培养2-3h到达gvbd期。
2.敲低cul9基因 处理组,注射cul9的morpholino,对照组,注射对照组morpholino。
4. 研究创新点
1目前关于Cullin9的作用机理研究较少;2以往研究主要集中在Cullin家族对有丝分裂的影响,对卵母细胞的减数分裂研究较少。
5. 研究计划与进展
2015年9月-2015年10月:相关文献查阅,试验方法学习摸索,试验条件的准备。
2015.10-2015.12:完成小鼠gv,gvbd,pro-mi,mi,ti,mii期卵母细胞的获得以及cul9的免疫荧光染色。
cul9敲低后,观察cul9的表达量以及下游因子survivin的表达量,统计第一极体排出率,统计纺锤体异性率和非整倍体率。
