1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
兔病毒性出血症(rabbit heamorrhagic disease, rhd)和兔巴氏杆菌病(pasteurellosis multocida, pm)是两种重要的家兔传染病,一旦爆发,会给养兔业带来惨重的经济损失。
2005年,兔病毒性出血症、多杀性巴氏杆菌病二联灭活疫苗获得一类国家新兽药证书,即为世界首创的疫苗。
然而该疫苗仅使用兔出血症死亡家兔内脏的组织毒以及致死性多杀性巴氏杆菌,通过灭活而研制成疫苗,在技术层面上仍旧属于传统疫苗研制领域。
2. 研究的基本内容和问题
1.1研究目标:通过免疫期攻毒实验和免疫期抗体效价检测实验评估兔病毒性出血症、多杀性巴氏杆菌新型二联苗的保护力,安全性,稳定性。
1.2研究内容: 1.2.1免疫期攻毒检验 1.2.2免疫期血清抗体效价检测 1.3拟解决的关键问题: 1.3.1包被抗原的选择 1.3.2检测方法的建立
3. 研究的方法与方案
1.研究方法 1.1免疫期攻毒实验 1.2分子克隆,蛋白表达、纯化技术 1.3 间接elisa 2技术路线 2.1免疫期攻毒检验 用使用剂量的疫苗免疫家兔,免疫后21天及4、5、6、7个月分别对免疫家兔进行强毒攻击,对其免疫效力进行评价.2.2检测兔瘟抗体效价的间接elisa方法建立兔出血症的免疫原为vp60,所以选用vp60作为间接elisa的包被抗原。
借鉴前人的研究,对于抗原包被浓度、血清稀释浓度、二抗稀释浓度、显色时间进行简单的优化。
2.3检测兔巴氏杆菌抗体效价的间接elisa方法建立 包括包被抗原的选择、表达、纯化、稀释浓度,血清稀释浓度,二抗稀释浓度、显色时间的优化。
4. 研究创新点
1.兔出血症、巴氏新型二联苗安全性、免疫效力、稳定性优于传统二联苗。
2.用抗体间接elisa方法对家兔免疫状况进行监测,有利于兔场对家兔免疫水平的了解。
3.该项目的实施有利于兔出血症、巴氏新型二联苗在新兽药证书获批之前进行推广,具有前瞻性。
5. 研究计划与进展
2015.08.31-2015.09.31 免疫期攻毒检验2015.10.08-2015.11.15 检验免疫期血清抗体效价的方法建立2015.11.15-2015.12.30 免疫期血清抗体检测和数据分析
