1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
课题意义:寻找普通小麦-纤毛鹅观草的特异分子标记,以定位、转移和利用纤毛鹅观草的有利基因。
国内外研究概况:muramatsu等以纤毛鹅观草作母本,普通小麦inayama komugi作父本杂交获得杂种f1,经染色体加倍育成普通小麦-纤毛鹅观草双二倍体。
为避免异源胞质带来结实率低等不利影响,王秀娥等以普通小麦中国春为母本与该双二倍体回交,连续回交后自交,从b1f7或bc2f6群体中通过c-分带、gish/fish技术以及rflp标记鉴定出了10个同胞质异附加系。
2. 研究的基本内容和问题
研究的目标:寻找普通小麦-纤毛鹅观草的特异分子标记内容:随机选取定位于小麦和大麦7个部分同源群上的引物对可能的普通小麦-纤毛鹅观草二体异附加系的基因组DNA进行扩增,以寻找其特异分子标记并确定异附加系所添加的染色体在第几同源群。
关键问题:寻找其特异分子标记并确定异附加系所添加的染色体在第几同源群
3. 研究的方法与方案
1、基因组dna提取2、pcr反应体系(10μl):反应体系中含 1 l,1buffer (10 nmol/l tris-hcl, 50 mmol/l kcl), 1.5mmol/l mgcl2, 800 mol/l dntp, 0.5 mol/l 引物,dna 模板 15~20 ng, 1u taq 酶, 加 ddh2o 定容至10 l。
pcr 反应条件为: 94℃预变性 4 min; 94℃变性 30 s, x℃复性 45 s (x: 根据引物要求的复性温度确定), 72℃延伸 1 min, 33 个循环; 72℃延伸 10 min,10℃保存。
反应结束后, 在扩增产物中加入 6加样缓冲液2 l (50 mmol tris-hcl, 50 mmol edta, 1%sds,0.25%溴酚蓝, 0.25%二甲苯青, 50%甘油), 在 8%非变性连续聚丙烯酰胺胶(acr ∶ bis =39 ∶ 1)上电泳分离。
4. 研究创新点
小麦EST和SSR引物根据Somers等[5]和Rder等[6]发表的序列,大麦STS引物参照Blake等[7]发表的序列,部分引物参照http://www.graingenes.org上登录的小麦和大麦引物序列由公司或实验室合成。
目前由于小麦的测序工作尚未完成,小麦-纤毛鹅观草特异分子标记的寻找工作较为缓慢,所以有很大的工作进展空间。
5. 研究计划与进展
计划在小麦7个同源群上各找5个左右的小麦-纤毛鹅观草染色体的特异分子标记
