1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
（1）课题意义水稻是世界上最重要的粮食作物之一，是世界2/3以上人口的主粮。
在中国杂交水稻种植面积约占水稻种植总面积的60%。
与常规水稻相比，杂交水稻提高了约20%-30%的产量，因此杂交水稻对水稻的增产做出了重要的贡献[1]。
2. 研究的基本内容和问题
(1) 研究目标实验室前期的研究表明rnase zs1可能参与对ubl40 mrna的加工，我们希望通过筛选互作蛋白探索rnase zs1在体内酶活功能发挥机理，进一步阐释水稻rnase zs1在体内参与温度响应的分子机制。
(2) 研究内容1、收集株1s的自然回复突变体mb101高温（26℃）处理过下4-6mm的小花；2、提取总rna，分离纯化mrna,；3、构建tms5-pgbkt7载体；构建mb101的cdna文库,； 4、通过酵母双杂交筛选与rnasezs1相互作用的蛋白。
(3) 拟解决的关键问题植物响应外界温度变化的过程是复杂而又敏感的，实验室前期的研究表明rnase zs1可能参与对ubl40 mrna的加工，从而影响水稻的育性。
3. 研究的方法与方案
(1) 研究方法和实验方案1、收集株1s的自然突变体mb101高温（26℃）处理过下4-6mm的小花；并提取总rna，分离纯化mrna,；2、构建tms5-pgbkt7载体；构建mb101的cdna文库,； 3、制备酵母感受态并进行转化，通过western检测目的蛋白表达的情况，并对目的蛋白进行毒性检测和自激活检测；4、通过酵母双杂交筛选与rnasezs1相互作用的蛋白；4、将初步确定的阳性克隆提取质粒后转入了大肠杆菌dh5α中，并进行菌落pcr检测这些阳性克隆是否有片段插入pgadt7载体。
5、根据菌落pcr结果提取大肠杆菌的质粒进行pcr测序反应，得到靶基因序列，通过生物软件比对，对初步得到的结果做好统计。
6、挑选感兴趣的基因进行反向酵母双杂交检测(将靶基因连到pgbkt7载体上，同时将jmj14连到pgadt7载体上，进一步验证两者相互作用的情况。
4. 研究创新点
植物和外界环境相互作用是十分复杂和敏感调控网络，我们通过研究植物转录后水平响应温度变化的分子机理研究，进而探索温敏核雄性不育分子机制。
5. 研究计划与进展
（1）2015年7、8月：收集株1s的自然突变体mb101高温（26℃）处理过下4-6mm的小花（2）2015年9月：提取总rna，分离纯化mrna（3）2015年10月：构建tms5-pgbkt7载体；构建mb101的cdna文库（4）2015年11、12月：酵母感受态制备，进行转化，通过酵母双杂交筛选与rnasezs1相互作用的蛋白（5）2016年1月：阳性克隆检测。
将初步确定的阳性克隆提取质粒后转入了大肠杆菌dh5α中，并进行菌落pcr检测了部分克隆是否有片段插入pgadt7载体。
（6）2016年3月: 提取大肠杆菌的质粒进行pcr测序反应，得到靶基因序列，通过生物软件比对，对初步得到的结果做好统计。
