1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
猪流行性腹泻是一种高度接触性肠道传染病。猪流行性腹泻病毒可以通过消化道、呼吸道传播，其中消化道传播是猪流行性腹泻的主要传播途径。各日龄猪均易感，发病急、传播快、流行广、治愈率低、病死率高，严重影响了养猪业的健康发展。近年来，该病在我国范围内的流行呈明显上升趋势，已成为危害养猪业的重要疾病。各种年龄的猪都能感染发病，哺乳仔猪、架子猪或育肥猪的发病率可达100%， 尤其哺乳仔猪受害最严重，母猪发病率为15%～90%。主要发生在冬季，夏季也可发生，我国以12～2月为本病高发时期。猪流行性腹泻病毒口服人工感染的潜伏期为1～2天，但自然发病的潜伏期可能较长。病毒主要经消化道传播，亦有经呼吸道传播的报道。哺乳仔猪受害最严重，会出现呕吐和水样腹泻。新生仔猪感染后常发生严重失水和死亡，病死率约为50%。断奶猪和育肥猪发病后会出现持续4～6天的水样腹泻，大多数病猪康复，但生长发育受影响，育肥后期的体重出现减损。母猪发病特点为精神萎顿、厌食和持续约1周的下痢。本病在4～5周期间可传遍整个农场，但其传播常有自限性。病理变化仅限于小肠。肠管胀满扩张，充满黄色液体，肠壁变薄，肠系膜充血，肠系膜淋巴结水肿。显微镜观察可见小肠绒毛缩短，绒毛与肠腺的比率从正常的7：1下降到约3：1。
猪流行性腹泻通常在春、秋、冬三季节发生。任何年龄的猪都可以感染pedv，pedv对日龄越小的猪致病性越强。发病猪和隐性带毒猪是本病的主要传染源，病毒常生存在于病猪肠道的绒毛上皮或者是肠系膜的淋巴结。被污染的器具、车辆、衣物等也可以成为本病的传染源，病毒甚至可以通过被污染的水源和食物来引起健康猪感染。在发病规律上，一般是成年猪舍先出现发病，病猪主要发生水样性腹泻，排出草绿色粪便，并散发恶臭味，之后导致整个猪群发生腹泻，并逐渐扩散至相邻猪舍，有时甚至导致整个猪场或者某一地区相继出现流行。
与其他冠状病毒的s蛋白一样，猪流行性腹泻病毒的s蛋白，在病毒粒子表面的纤突糖蛋白上，一般是病毒粒子和细胞表面受体结合后，通过膜融合侵入宿主细胞，在感染宿主体内介导中和抗体产生的过程中起到了重要作用。此外，它与体外的生长相适应，可使体内毒力减弱。因此s蛋白可以作为制备猪流行性腹泻病毒有效疫苗的一个主要目标。研究表明，pedv的s蛋白对被感染宿主中和抗体的产生、特异性受体的结合及细胞膜融合方面具有重要的生物学意义，s1可识别受体，s2负责病毒囊膜与宿主细胞膜融合。由于受到宿主免疫选择的压力，s蛋白易发生变异，因此，s蛋白对于了解pedv的流行现状、分子多样性、基因突变的联系及疫苗的研发也有很重要的作用。
2. 研究的基本内容和问题
研究目标、内容
1．对不同代次的pedv yz2016株的s基因、n基因和orf3基因进行测序
3. 研究的方法与方案
根据genbank数据库中pedv的全基因组序列，在pedv的保守区使用primer premier5.0软件设计5对特异性扩增引物扩增pedv yz2016株部分片段。扩增其s1基因片段、s2基因片段、s3基因片段，n基因片段和orf3基因片段。
pedv yz2016株传代培养及病毒的收集
将vero细胞传代后24h后，镜检可见单层细胞铺满，用纯dmem洗2次后，加入50μl的病毒液950μl的dmem和终浓度为6μg/ml胰酶的混合液，在37℃的恒温培养箱中静止吸附1h，吸附时每隔20min轻摇数次，后弃去病毒液和胰酶的混合液，加入含4%浓度胰酶的dmem的维持液，24h后在镜检下可见80%的细胞病变时，收取病毒。将病毒培养基反复冻融3次，在4℃下8000rpm离心5min取上清可收获病毒液。以此方法再次将收集到的病毒再次接种vero细胞。在此次实验中，取20代次和40代次的毒株进行基因序列分析及比较。
4. 研究创新点
PEDV YZ2016株属于新分离的流行毒株，目前对其很多信息不明了，对其进行基因序列分析，可以获得其遗传稳定性和遗传进化分析，从而为今后的PED的防治提供参考。
5. 研究计划与进展
2018年09月-2018年11月 病毒的传代收集
2018年11月-2019年01月 病毒s基因、n基因、orf3基因的测序
2019年01月-2019年05月 数据处理及论文撰写
