菌株Pigmentiphaga sp. H8中3,5-二溴-4-羟基苯甲酸的代谢调控机制开题报告

 2022-02-07 20:43:20

1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)

1.研究意义

卤代芳烃化合物具有稳定性好、耐疲劳、阻燃、耐热等特性,广泛用于工农业生产,如农药、染料、医药、助溶剂和阻燃剂等[1,2]。由于卤代芳烃具有难降解、高毒性等热点,很多被列为“持久性有机污染物”(persistent organic pollutants, pops)和“优先控制污染物”(priority pollutants)[3,4]。卤素原子的强电子吸附效应使得卤代芳烃易与生命细胞内的酶系统结合进而对细胞产生毒性[5]。为了适应卤代芳烃的毒性环境,细菌进化出了多种类型的卤代芳烃代谢途径[6,7]。事实上,代谢调控是微生物适应环境变化并作出应答的一类重要机制,在微生物适应污染物环境和降解污染物中发挥关键作用[8]。因此,研究微生物对卤代芳烃的代谢调控机制具有重要的科学意义。

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2. 研究的基本内容和问题

1.研究目标:

本项目以菌株pigmentiphaga sp. h8中调控3,5-二溴-4-羟基苯甲酸代谢的转录调控因子odcr为研究对象,通过鉴定转录调控单元,考察转录调控的影响因素、启动子结合位点等,最终从分子水平阐明odcr对3,5-二溴-4-羟基苯甲酸降解基因簇odc的转录调控机制。

2.研究内容:

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3. 研究的方法与方案

1. 研究方法及实验方案

(1) 转录单元鉴定

使用细菌rna提取试剂盒(tiangen)提取3,5-二溴-4-羟基苯甲酸诱导培养后的菌株pigmentiphaga sp.h8的总rna,并用dnaeraser(takara)去除残留的基因组dna。以上述rna为模板进行反转录pcr获得cdna,再以cdna为模板,通过pcr扩增基因簇中所有相邻基因组成的片段来判断相邻的两个基因是否共转录,从而确定转录单元。

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4. 研究创新点

国内外关于卤代芳烃微生物代谢的调控机制研究十分薄弱,尤其是代谢基因表达的紧缩调控策略对微生物适应性进化的作用与意义更是缺乏系统、深入的阐明。本项目将从分子水平阐明菌株Pigmentiphaga sp. H8中OdcR对3,5-二溴-4-羟基苯甲酸降解基因簇odc的转录调控机制,揭示转录调控对细菌适应性进化的意义。

5. 研究计划与进展

1.研究计划:阐明转录调控因子odcr对3,5-二溴-4-羟基苯甲酸降解基因簇odc的转录调控机制,揭示转录调控对细菌适应性进化的意义。

2.预期进展:①2018年10月-2019年1月:转录调控因子odcr的功能验证、鉴定odcr调控的转录单元并确定转录调控的影响因素。

②2019年2月-2019年4月:鉴定odcr与启动子的结合位点并阐明转录调控因子odcr与启动子的作用机制。

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