1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
1 本课题的意义、国内外研究概况、应用前景等（列出主要参考文献）
1.1 连接酶spystapler
本质无序蛋白（intrinsicallydisordered proteins, idps）是指在生理条件下没有稳定二级结构的一类特殊的蛋白质。虽然大多数蛋白质在执行特定功能时需要某些特定的构象，但idps也被证明是具有功能的，其在生理条件下可以作为活性酶。最近，wu等人[1]报道了一种功能强大的idp——spystapler，这是一种连接酶，且不论是哪种环境条件下（体外或是体内），它都能够催化spytag和bdtag之间（两种肽标签）异肽键的形成。研究表明，尽管spystapler在单独存在时呈现出无序的状态，但一旦有肽标签存在，且无论spytag和bdtag在蛋白质分子中的相对位置（n-端，c-端或链中间）如何，它都能够将这两个tag有效的连接起来，trimethylaminen-oxide（tmao）的存在则可以进一步提高这一连接效率。
2. 研究的基本内容和问题
2 研究的目标、内容和拟解决的关键问题
2.1 研究目标及内容
首先，构建适当载体并将spystapler基因导入大肠杆菌中进行外源表达，理论上其蛋白纯化产物经过sds-page应显示为分子量为8 kda的单一条带；其次，分别将gfp和rfp连接上bdtag和spytag，外源表达并纯化；而后将连接酶spystapler、gfp和rfp置于同一体系下，连接酶spystapler会将bdtag和spytag连接起来，即gfp和rep会被连接成复合体，电泳检测是否连接；最后，将bdtag与孢衣基因coty或cotz相连接，将spytag与gfp相连接，将二者置于含有连接酶spystapler的体系之中，检测gfp是否成功与芽孢偶联。若成功，即代表本实验的芽孢表面展示系统被成功构建。
3. 研究的方法与方案
3 研究方法、技术路线、实验方案及可行性分析3.1 技术路线
4. 研究创新点
4 特色或创新之处
本实验利用连接酶SpyStapler，将目的蛋白连接至芽孢表面，构建一个新型的芽孢表面展示系统。本系统充分利用了芽孢易获得，抗逆性极强，且易保存的特点，同时又避免了蛋白融合表达可能存在的弊端，为快速获得稳定的、大量的甚至是可商业化的蛋白抗体提供了新的策略。5. 研究计划与进展
5 研究计划及预期进展
| 日期（2019年） | 预期进度 |
| 3.15-3.30 | SpyStapler、GFP-BDTag、RFP-SpyTag的外源表达 |
| 3.30-4.5 | 检测SpyStapler是否成功连接 |
| 4.5-4.25 | 构建芽孢-BDTag复合体 |
| 4.25-5.10 | SpyStapler连接芽孢和GFP |
| 5.1-5.15 | 撰写、修改毕业论文 |
