1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
我们实验室研究的灵芝（ganoderma lucidum）是一种大型药用担子菌，我国传统医学认为灵芝具有固本扶正、滋养机体、延年益寿等诸多功效[1]。而氮源是在灵芝生长过程中的主要营养物质，对灵芝菌丝体生长和子实体产量都有影响。
研究证明，在细胞氮代谢途径中，gata转录因子area起到非常重要的调控作用，area是氮利用中的关键转录因子，它可以通过对氮代谢相关基因调控来控制生物体对不同氮源的利用[2]。在对area基因的功能研究中，人们发现在酵母和丝状真菌中,氮代谢受到gata转录因子area/nit2家族调控的[3]。转录因子主要作用是调控基因的转录，并且进入细胞核与特殊结构特异性结合才能发挥作用。area在其他真菌或微生物中被广泛地研究，但在大型担子菌中对于该转录因子对下游基因的转录调控未有研究。所以我们需要外源表达area研究area作为转录因子发挥的功能。
本课题旨在通过体外表达area蛋白，拟通过凝胶阻滞电泳（emsa）实验验证area对下游基因的调控作用。所以第一步要体外表达蛋白。重组蛋白表达技术是研究蛋白质的功能和结构以及筛选靶向药物的有力工具，它在基础科学和医学中起着重要的作用。为了研究area作为转录因子发挥的功能，我们需要选择合适的外源蛋白表达系统，了解如何高效表达目的基因，从而选择合适的表达系统，优化重组蛋白的生产，并且提高它的产量[4]。
2. 研究的基本内容和问题
1）研究目标
a)构建灵芝转录因子area不同原核与真核表达载体；
b)构建并筛选出能表达特定状态的目的蛋白的外源表达体系；
3. 研究的方法与方案
1）研究方法
（a）area表达载体构建
1.提质粒（碱裂解法）
4. 研究创新点
a)利用多种方法平行式研究，实验设计合理，具有可行性；
b) 实验思路清晰，大胆尝试构建的新方法;
c)有理论依据的同时有一定的科研前景。
5. 研究计划与进展
2018.11 – 2018.12 构建area真核与原核表达载体，并进行转化；
2019.1 -2019.4 诱导不同表达系统下目的蛋白的表达，sds-page检测表达结果；
2019.4 - 2019.5目的蛋白的纯化。
