1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
研究意义:
地衣芽孢杆菌( bacillus licheniformis) 是一种在土壤中常见的兼氧革兰氏阳性菌,目前在对山西老陈醋[1],涨袋火锅料[2],窑泥[3]进行微生物分离筛选的过程中也有发现。能够产生耐热、耐旱、抗紫外线和有机溶剂的强抗逆性内生芽孢,生存期长且不消耗养分,不失活,转移到合适的环境中时萌发生成活细胞,继续发挥营养作用。地衣芽孢杆菌能够分泌产生生物活性酶、抗菌肽、杆菌肽等多种抗性物质,具有抑菌谱广、易于产业化、易于存活和定殖等优点[4],可用于吸附环境中的重金属、降解农药、降解水体及空气中的污染物等[5]。
基因工程菌应具备以下几个条件:发酵产品具有高浓度、高转化率和高产率;菌株能利用常用的碳源,并可进行连续发酵;菌株不是致病株,也不产内毒素;代谢控制容易进行;能进行适当的dna重组,并且稳定。大肠杆菌是实验室最为常用且研究较为深入的基因工程菌,但在一定方面,其蛋白表达量无法满足我们的需求,因此希望寻找长势良好蛋白分泌量高的菌株来作为受体,以进一步提高目的蛋白的表达量。而地衣芽孢杆产酶量高、酶系丰富、细胞壁组成成分相对简单、异源蛋白表达水平较高等[6],具备成为一种良好的异源蛋白表达宿主的潜力。
2. 研究的基本内容和问题
研究目标
从野外土壤中分离得到长势优良、蛋白分泌量高的地衣芽孢杆菌菌株,并将其作为表达载体,导入外源基因以提高基因产物的产量。
3. 研究的方法与方案
研究方法及实验方案
1.分离筛选生长较好的芽孢杆菌菌株
(1)对野外随机采集的土壤样本进行梯度稀释至合适浓度
4. 研究创新点
特色或创新之处
实验室多以大肠杆菌等模式菌株作为载体进行转化表达,本课题通过筛选得到长势良好且蛋白分泌量高的地衣芽孢杆菌菌株,以此菌株作为表达载体使得目的产物的产量有进一步的提高。
5. 研究计划与进展
研究计划及预期进展
通过半个月的时间,大量筛选得到几株长势优良、蛋白分泌量高的菌株
用一周的时间进行预实验,将实验室已具备的质粒转化入目的样本菌株以确定其转化效率及酶分泌量
