1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
大豆疫霉(phytophtha sojae)在大豆整个生育期中均能够侵染引起其根腐病,为大豆生产上毁灭性的病害之一。
我国于1986年将大豆疫霉列入a1类进境植物检疫对象。
随着大豆进口的日益增加,大豆疫霉根腐病的传入已严重威胁我国黑龙江省和福建省等大豆主产区的生产安全,因此研究有效的防治策略对该病害进行控制十分迫切。
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2. 研究的基本内容和问题
1.研究目标:(1)利用crispr/cas9技术敲除大豆疫霉(phytophtha sojae)psbzpc17转录因子。
(2)研究psbzpc17转录因子对大豆疫霉的生长发育、致病性等的影响。
2.研究内容:(1)构建crispr/cas9系统相关载体,通过peg介导的原生质体转化,获得敲除突变体;(2)对突变体进行生长发育测定,并接种大豆根部、叶部,分析致病表型。
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3. 研究的方法与方案
1.研究方法:(1)crispr/cas9载体构建:根据brett m tyler教授实验建立的大豆疫霉crispr/cas9系统设计sgrna。
利用in-fusion方法构建所需sgrna载体和同源片段载体。
(2)大豆疫霉转化:利用peg介导的原生质体转化的方法,将sgrna载体和同源片段同时转入大豆疫霉。
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4. 研究创新点
利用CRISPR/Cas9系统敲除根部侵染特异表达的转录因子PsBZPc17,对其进行表型分析,分析其是否参与侵染大豆的不同器官。
5. 研究计划与进展
2017年8月上旬-2017年10月上旬:CRISPR/Cas9相关引物设计及载体构建2017年10月下旬-2017年12月上旬:PEG法转化大豆疫霉,筛选转化子2017年12月下旬-2018年3月下旬:转化子生长发育与致病性相关表型分析2018年4月上旬-2018年5月上旬:材料总结,准备结题
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