1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
研究意义、应用前景dna甲基化是一种较稳定的表观遗传修饰，已有的研究表明，dna甲基化修饰对植物的生长、发育和抗逆性等都有至关重要的作用。
目前对 dna 甲基化发生过程的研究已经比较深入，但是对于dna 去甲基化机理的研究仍较浅显。
尽管当前已经发现了一些负责 dna 去甲基化作用的关键酶，但是 dna 去甲基化是一个复杂的过程，可能有多个蛋白因子参与，涉及目标位点的特异性选择、去甲基化酶与目标位点的正确结合、5-mec的切除过程和dna的修复过程等。
2. 研究的基本内容和问题
研究目标、拟解决的关键问题迄今为止，rddm通路的作用机制还有待进一步完善，如dna甲基化的建立，是如何起始的，以及rddm效应复合体是如何招募drm2到待甲基化位点上的。
此外，更为重要的是，dna去甲基化方面还有很多待解决的问题，如dna去甲基化酶是如何特异性地被招募，参与dna去甲基化过程中的碱基切除修复途径的作用因子有哪些，dna去甲基化过程是如何起始的。
当用rd29a-luc系统进行遗传筛选时，不仅筛选到了与逆境胁迫信号转导有关的突变体，也筛选到了与dna去甲基化有关的突变体，即ros1，然而目前对ros1的作用机理并不十分清楚，包括ros1与哪些蛋白因子在一起工作？ros1的多级调控是怎样进行的？本实验的主要目的是继续进行新的蛋白因子筛选，以发现更多的新蛋白，完善ros1参与的dna去甲基化过程。
3. 研究的方法与方案
研究方法、实验方案1.诱变Col-LUC高荧光的亲本体系a． 种子过夜泡涨，加入适量EMS诱变剂，摇8-9h，清洗2-3hb． 配制MS培养基，点种诱变的种子M12.筛选候选突变株a． 收获M1的种子M2，单粒播种后，分别挑选两个筛选体系的目标候选株，收获M3，并确认M3的荧光表型b． CTAB法提取DNA，设计CAPS或dCAPS 引物做PCR鉴定rdr6突变位点、ros1-7突变位点3.图位克隆a． 杂交，初步判断突变类型，排除已知突变体，创建克隆群体b． CTAB法提取克隆群体DNA,利用拟南芥简单序列长度多态性（Simple Sequence Length Polymorphisms, SSLP）分子标记设计引物进行初步定位c． 设计CAPS或dCAPS引物或其他引物进行精细定位d． 根据精细定位的结果筛选候选基因，设计引物测序确定突变基因和突变位点。
可行性分析利用Col-LUC系统已经筛选到了包括ROS1, IDM1, IDM2, SUF4在内的参与DNA去甲基化的蛋白因子, 充分说明此系统完全可以用来研究DNA去甲基化。
4. 研究创新点
通过COL-LUC遗传筛选体系筛选出一个参与DNA去甲基化途径的新基因，后续工作将对此基因进行功能的研究，研究此基因是否与ROS1在同一途径进行DNA去甲基化，进一步丰富并且完善植物DNA去甲基化的分子机制。
5. 研究计划与进展
研究计划2017.09-2017.10：学习本科相关的课程，认真阅读实验相关文献，掌握实验的一些基本技能，准备高荧光的col-luc的亲本，准备诱变。
2017.10-2017.12：种植m1，收获m2。
种植m2并获得荧光低的候选突变体，并与rdr6、idm1-4、ros1-7、96p进行杂交。
