番茄长链非编码RNA LeLNR1的初步功能鉴定开题报告

 2022-02-08 20:10:04

1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)

课题的意义:深度转录组分析发现人90%的基因组是转录的,然而其中只有12%能够编码蛋白。

这说明真核生物基因组中含有巨量的rna分子不具有蛋白编码功能,这些被称为非编码rna。

非编码rna根据长度又被分为两类,其中长度大于200个核苷酸的非编码rna称为长链非编码rna(long non-coding rna, lncrna)。

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2. 研究的基本内容和问题

研究的内容:1、已通过农杆菌介导法获得一批番茄 lelnr1的过表达以及rnai转基因植株,对其进行分子型鉴定。

提取 lelnr1的过表达植株以及rnai转基因的dna,利用基因特异引物以及载体特异引物通过pcr扩增鉴定目的基因是否存在。

提取 lelnr1的过表达以及rnai转基因植株的rna,利用试剂盒(vazyme)进行反转录以及qrt-pcr,检测目的基因的表达情况。

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3. 研究的方法与方案

研究方法:1、植株的分子型鉴定:提取植株的dna,利用基因特异引物以及载体特异引物通过pcr扩增鉴定目的基因是否存在。

提取植株的rna,利用试剂盒(vazyme)进行反转录以及qrt-pcr,检测目的基因的表达情况。

2、农杆菌转化法:根癌农杆菌和发根农杆菌中细胞中分别含有ti(tumour inducing)质粒和ri质粒,其上有一段t-dna(transferring dna),农杆菌通过侵染植物伤口进入细胞后,可将t-dna插入到植物基因组中,并且可以通过减数分裂稳定的遗传给后代。

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4. 研究创新点

植物中lncRNA的研究报道很少,番茄中还没有长链非编码RNA相关研究的报道,对LeLNR1病毒抗性机制研究对揭示番茄长链非编码RNA的特征及调控均具有重要意义,对将来番茄其它长链非编码RNA的研究提供理论和技术支持。

5. 研究计划与进展

2017.11.1-2017.11.30完成对番茄lelnr1的过表达以及rnai转基因植株的分子型鉴定,筛选出能够稳定表达lelnr1基因的植株作为实验植株。

2017.12.1-2017.12.31侵染性克隆接种tylcv,观察植株表型。

2018.1.1-2018.1.31完成核质分离与原位杂交,对lelnr1进行亚细胞定位。

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