1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
一、研究意义及进展1.1灵芝及灵芝酸的药用价值灵芝在我国已有悠久的药用历史, 始载于《神农本草经》中， 具有补中益气、滋外强壮、扶正 固本、延年益寿等功效, 是一种名贵药材。
研究表明，灵芝属真菌含有多种生理活性物质，包括多糖类 、核苷类、呋喃类衍生物、甾醇类、生物碱类、多肽氨基酸类及三萜类[1]。
其中，灵芝酸是灵芝的重要活性成分，属于三萜类物质，目前能分离到的有100多种[2]。
2. 研究的基本内容和问题
一、研究的目的完成MepB,MepC这两个基因在灵芝中的沉默，初步研究灵芝铵通透酶在调节氮代谢及灵芝酸合成中的功能。
二、研究的内容1.MepB,MepC沉默载体的构建2.MepB,MepC沉默载体的灵芝脂质体转化3.沉默转化子的筛选及沉默效率的验证4.沉默转化子三萜含量的测定三、拟解决的关键问题1.MepB,MepC沉默菌株的构建2.MepB,MepC在灵芝三萜合成中的作用
3. 研究的方法与方案
一、研究方法 将mepb，mepc的沉默片段构连入实验室前期构建的沉默载体pan7-ura3-dual上，运用脂质体转化的方法筛选沉默菌株。
在对照菌株和沉默菌株中检测：（1）氮利用相关基因的转录水平；（2）灵芝三萜含量及三萜合成途径中关键酶基因的转录水平。
二、技术路线引物设计，目标片段pcr，构建沉默载体，转化灵芝，转化子筛选，相关表型测量三、实验方案1.mepb和mepc沉默载体的构建目的片段与t载体连接，进行验证，再与pmi载体酶连，构建载体。
4. 研究创新点
铵通透酶在真菌氮代谢中起重要作用，但其在灵芝中的功能尚未被研究清楚，很可能会对灵芝三萜的产量有影响。
5. 研究计划与进展
1、2017.092017.10理论学习阶段，阅读相关文献，了解实验流程，并熟练掌握各种实验技术。
2、2017.102018.04构建mepB,mepC基因的沉默表达载体沉默表达载体的转化灵芝三萜含量等成分的测定3、2018.042018.05整理分析数据，撰写毕业论文，完成论文答辩。
