1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
1 本课题研究意义
对基础研究和农业生产应用来说，随着越来越多植物基因组测序的完成，阐明植物功能基因表达产物生物学作用的需求也日渐迫切。rnai，t-dna 插入突变均是研究具体植物基因功能的常见技术。rnai 技术快速便捷的在转录后水平抑制目的基因的表达，但是具有不完全沉默，某种情况下遗传不稳定等限制性。而t-dna插入突变虽可遗传，但是插入位点是随机的，不能对特定位点基因进行突变。尽管像拟南芥、水稻等模式植物都有大规模的t-dna插入突变库，但是并不是每个基因都有对应的突变体，而且有些突变体因插入位置不合适并未造成该基因的完全沉默，这样的突变体就不适合用于基因功能研究。
crispr/cas9系统作为功能强大的基因组编辑工具被成功应用于包括植物在内的各种生物体。它可以高效定点突变目的基因，并且由此获得的突变可稳定遗传，经过筛选最终可以形成稳定的突变体株系[1]。在talen平台的基础上，已经建立了适用于植物的 crispr/cas9 系统。并在具体的基因功能研究中确实得以应用。
2. 研究的基本内容和问题
4 研究的目标、内容
(1)选择col-0野生型合适的突变的位置，设计引物，构建到载体35s-cas9中，用蘸花法浸染col-0野生型苗。
(2)后代筛选抗性苗，检测目标位点的基因突变情况。
3. 研究的方法与方案
6 研究方法
（1）筛选col-0野生型基因序列中所包含的cas9可以识别的pam位置，选择合适的突变的位置，设计引物，构建到载体35s-cas9中，并通过测序的方法确定没有发生突变。
（2）将构建好的载体通过酶切酶连与双元表达载体pc1300融合，转化农杆菌，用蘸花法侵染col-0野生型苗。
4. 研究创新点
9 特色或创新之处
利用最新的基因编辑技术，解决两个基因在遗传学上由于连锁关系而难以获得通过传统杂交方法获得双突变体的难题。
5. 研究计划与进展
10 研究计划
10.1构建载体
将设计好的sgrna与用bbsⅠ酶切过的atu6启动子的粘性末端连接→将连接后产物用ecori酶切后与含有35s启动子的cas9连接
